Question

什么是革兰氏染色法？主要步骤是？关键步骤？

Answer 1

一、革兰氏染色法

不少于两种染料参与的染色方法称之为复染法，革兰氏染色法属于复染法类的一种染色方法。由结晶紫、碘液、番红参与，通过染料对细菌的细胞壁的着色，来区分革兰氏阴性菌与阳性菌的一种方法。

二、主要步骤及关键步骤

（1）制片。

取菌种培养物常规涂片、干燥、固定。 

要用活跃生长期的幼培养物作革兰氏染色；涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性；火焰固定不宜过热（以玻片不烫手为宜）。 

（2）初染。

滴加结晶紫（以刚好将菌膜覆盖为宜）染色1-2min，水洗。 

（3）媒染。

用碘液冲去残水，并用碘液覆盖约1min，水洗。 

（4）脱色。

用滤纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜，在白色背景下，用滴管流加95%的乙醇脱色，直至流出的乙醇无紫色时，立即水洗。 

乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节：脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌；脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。因而脱色时间一般为20-30s。 

（5）复染。

用番红液复染约2min，水洗。 

（6）镜检。

干燥后，用油镜观察。菌体被染成蓝紫色的是革兰氏阳性菌，被染成红色的为革兰氏阴性菌。

扩展资料：

革兰氏染色的原理 

结晶紫（C25H30ClN3）当中的CL-与I-发生氧化还原反应生成不溶于水的蓝紫色复合物（C25H30lN3）。

革兰氏阳性菌细胞壁较厚且肽聚糖网层次多而交联致密，进行脱色时，因失水反而使网孔缩小，再加上结构中不含类脂，所以脱色处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内。

而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过脱色处理后后仍呈无色状态，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。

参考资料来源：百度百科——革兰氏染色法

Answer 2

革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师Gram创立。未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察。染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。革兰氏染色属复染法，即将标本固定后，先用结晶紫染色1分钟后水洗，然后加革兰碘液媒染一分钟后用酒精脱色，再用稀释石炭酸复红复染。染色后除可以看到细菌形态外，还可将细菌分为两大类，即不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G﹢）。被酒精脱色复染成红色者为革兰氏阴性菌（Gˉ）。革兰氏染色原理尚不肯定，可能与细菌所带核糖核酸、细菌壁结构通透性、等电点等因素有关。致病菌如金黄色葡萄球菌、绿色溶血性链球菌、肺炎球菌、白喉杆菌、炭疽杆菌等属革兰氏染色阳性菌。百日咳杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌、流行性脑膜炎双球菌、淋病双球菌等均属革兰氏阴性。所以根据细菌的革兰氏染色性质，可以缩小鉴定范围，有利于进一步分离鉴定，以对疾病做出诊断。又由于各种抗生素的抗菌谱不同，革兰氏染色尚可做为选用抗生素的参考。

革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：
1）涂片固定。
2）草酸铵结晶紫染1分钟。
3）自来水冲洗。
4）加碘液覆盖涂面染1分钟。
5）水洗，用吸水纸吸去水分。
6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，30秒后水洗，吸去水分。
7）蕃红梁色液（稀）染10秒钟后，自来水冲洗。干燥，镜检。
染色的结果，革兰氏正反应菌体都呈紫色，负反应菌体都呈红色。

Answer 3