PCR的基本原理是什么？其基本流程如何？
根据DNA扩增的目的和检测的标准，通常业界将PCR仪分为普通PCR仪、梯度PCR仪、原位PCR仪、实时荧光定量PCR仪等四类。
1.普通的PCR仪器：主要是做简单的，对目的基因退火温度的扩增，主要应用于科研研究，教学，医学临床，检验检疫等机构；
2.梯度PCR仪可一次性进行PCR扩增，主要用于研究未知DNA退火温度的扩增，主要用于科研，教学机构；
3.原位PCR仪用于细胞内靶DNA的定位分析，不但可以检测到靶DNA，又能标出靶序列在细胞内的位置，于分子和细胞水平上研究疾病的发病机理和临床过程及病理的转变有重大的实用价值；
4.实时荧光定量PCR仪实在普通PCR仪的基础上，增加一个荧光信号采集系统和计算机分析处理系统，具有单通道、双通道和多通道之分，因一次只能检测一种目的基因的扩增量，需多次扩增才能检测完不同的目的基因片段的量，主要用于医学临床检测、生物医药研发、食品、科研院校等行业和机构。
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一、基本原理：PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。
在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。
二、PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：
1、模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备。
2、模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。
3、引物的延伸：DNA模板--引物结合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。
重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
扩展资料：
在实践中，聚合酶链式反应（PCR）可以因各种原因而失败，部分原因是由于其对于污染的敏感性，导致扩增错误的DNA产物。正因为如此，人们已经开发了一些技术和步骤来优化聚合酶链式反应条件。将聚合酶链式反应前的混合物与潜在DNA污染物分开的实验室方案和流程解决了外源DNA的污染问题。
这通常包括从用于分析的区域分理出聚合酶链式反应的设定区域或者说聚合酶链式反应产物的纯化，一次性塑料制品的使用，及对反应装置之间的工作台面彻底清洁。引物的设计技术在改善聚合酶链式反应产物产率和避免杂产物的形成是很重要的。
替代缓冲成分和聚合酶的使用有助于较长或存在其他问题的DNA区域的扩增。在缓冲体系中加入试剂，如甲酰胺，或会增加聚合酶链式反应的特异性和产量。可以利用计算机模拟理论聚合酶链式反应结果（电子聚合酶链式反应），以协助在引物设计。
参考资料来源：百度百科-聚合酶链式反应
AmBeed
2024-07-19 广告
PCR的一般过程是什么
基本步骤：变性：加热使双链DNA变为单链； 退火：降温使引物和互补模板在局部形成杂交链 ；延伸：耐热DNA聚合酶按5’→3’方向催化以引物为起始点的延伸反应。生物一一四。
