Question

已知一个物种的基因组,怎么克隆目的基因

Answer 1

这个呢一般的做法就是首先构建基因文库或者cDNA文库， 基因文库和cDNA文库建立起来后，下一步的工作是从一个庞大的基因库中分离出所需要的重组体克隆，这是一件难度很大，费时费力的工作。一种方法是根据重组体某种特征从库中直接挑选出重组体，这种方法叫做“选择”；另一种方法是把库中所有的重组体进行一遍筛查，这种方法叫做“筛选”。

1.原位杂交法：这一种利用特异探针的直接选择法，是一种十分灵敏而且快速的方法，用于杂交的探针可以是双链DNA，也可以是单链DNA，或是RNA。杂交的检测常用放射性同位素标记探针，通过自显影来进行。显然，有效进行杂交筛选的关键是获得特异的探针。探针的获得有如下方法：
①如果目的基因序列是已知的，或部分序列是已知的，探针可以从已有的克隆中制备，或用PCR方法扩增。
②如果目的基因是未知的，而有其他物种的同源序列，那么可以用同源序列做探针。
③如果目的基因未知，
但知道它对应的蛋白质序列，
可根据蛋白质序列设计相应的核酸探针。

2．扣除杂交法：这是一种筛选方法，难度很大，是面对目的基因未知，同源基因未知，蛋白质序列未知的情况的。基本原理是找到该基因的高表达细胞，提取相应的mRNA，并与一般细胞提取的mRNA进行比较，分离一般细胞不存在而高表达细胞存在的mRNA，然后用该mRNA逆转录生成cDNA。

另外，若目的基因已知的话，简单的PCR扩增就行了。

追问

谢谢，那已知基因组，怎么设计目的基因的引物呢