Question

纯化后的蛋白在含有高浓度nacl的情况下浓缩容易沉淀吗

Answer 1

理由相信，浓度越高，对保存蛋白质越有利。加入 PEG 和更换 缓冲液种类是一种值得试验的方法，但结果如何还在两可之间，没试过就不会知道。

镍柱下来以后，溶液中混有相当多咪唑和议定含量的Ni，都有可能引起蛋白质不稳定变性沉淀。

我在纯化一种蛋白质时，也遇到过相同的情况，虽然蛋白质不同，但是也许能有帮助。

镍柱后，用含 EDTA 的缓冲液透析，除去 Ni ，再过 DEAE 离子交换柱，之后透析再浓缩，分装小管，-80度保存。一次使用一支。
理论上说蛋白质应在高浓度情况下保存，但当缓冲溶液中含有大量盐而且目的蛋白中含有大量输水氨基酸的情况下，高浓度就不利于保存。
在这种情况下，如果你不想太多的稀释蛋白，可以选择适当脱盐，如透析、凝胶过滤、超滤等，但应保持缓冲液具有一定的离子强度（500mM NaCl这个浓度太高，可以降到100），如果还不行的话，可以添加甘油至终浓度5%左右。
Ni纯化最好不要用Tris，可能会影响Ni的结合。