Question

一道生物选择题，与基因工程有关（高中）

5．利用以下提供的酶和质粒，选用合适的酶切后构建了满足筛选需求的目的基因-质粒连接物（标为D）下列有关叙述中，错误的是（A）

A．DNA上的每个酶切位点只能被一种特定的限制性核酸内切酶剪切
B．构建连接物D时只能用BamHⅠ剪切质粒，而不能选用MboⅠ
C．连接物D有两种，而其中只有一种能满足基因工程的表达要求
D．连接物D中MboⅠ的酶切位点至少有3个，而BamHⅠ的切点可能没有

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Answer 1

A，错，一个酶切位点可被多种限制性核酸内切酶剪切，如Mbc1能够切割BamH1的位点

B，对，若选用选用MboⅠ，则质粒会被切成两段（有两个酶切位点）
C，对，方向（目的基因插入的方向有两种，其中一种是对的）
D，对，目的基因插入后，连接物D中MboⅠ的酶切位点至少有3个（A处2个，B处1个）BamHⅠ的切点可能没有，主要看目的基因的序列

追问

B和D看不懂额，（不能有两个酶切为点吗？）（主要看目的基因的序列，怎么看的？）

追答

好吧，我再解释下
B，一个环被切两刀就会被切成两个线性片段了，不利于目的基因的连接（至于为什么就不解释了）
D，怎么看？就是看目的基因在被切之前他的酶切位点处的碱基序列是不是GGATCC如果是就有，不是就没有

追问

不是没有告诉我们目的基因是什么吗，我们要怎么知道他的酶切位点处的碱基序列啊，麻烦你了，我问题好多啊...

追答

是没有告诉我们目的基因是什么，但是他肯定有GATC这样一个序列（要连接就必须与质粒有相同的粘性末端），也正是因为没有告诉我们目的基因的序列所以才不确定到底有没有BamHⅠ的切点。

Answer 2

首先省点时间直接选A，课本上说的很明白是一种限制酶只能切割一个特定的序列，反过来不成立
B答案是对的，如果用M酶去切割，维生素AB两个抗性的基因都会被干掉，不行！
c就是方向问题应该好看出是对的
D也是对的，首先你从B答案可以看出，一定要用B酶，所以构成质粒后，插入目的基因的两端一定有两个切点(因为D是构建好的，已经插入了目的基因)，然后是抗生素B那里还有个，但是，目的基因可能还有，所以至少3个，所以M酶有3个，同理得B酶可能有n个在目的基因那里,也可能有两个在端点，也可能没有。

追问

那B酶不是至少有两个切点了么？D选项可不可以再讲一下，越详细越好额...拜托拜托了

Answer 3

很显然，两种酶的酶切位点很相像，Mbc1能够切割BamH1的位点，所以A错误

追问

麻烦把BCD也分析一下额...BCD为什么是对的呢

Answer 4

这道题应该选择D吧，很明显有一个BamHⅠ的酶切位点