Question

大肠杆菌培养基

怎么制作

Answer 1

培养基的基本成分

一般的培养基均需要碳源、氮源、无机盐和水等（具体见教材15页“100mL牛肉蛋白胨培养基的营养构”）。

（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基

1.牛肉膏蛋白胨固体培养基配方（即计算）

物质

牛肉膏

蛋白胨

NaCl

琼脂

水

重量

5g

10g

5g

20g

定溶至1000mL

2.称量
按比例称取各种物质，注意事项：牛肉膏要放在称量纸上称量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶盖。

3.溶化：先将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯，加少量水，加热至牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。加入蛋白胨和氯化钠，用玻璃棒搅拌使之溶解，再加入琼脂，搅拌，待溶解后，加自来水定溶至100mL。

4.灭菌：将配制好的培养基放到锥形瓶中（瓶口加棉塞，包上牛皮纸），连同培养皿（3～5套，用几层报纸包好）一起放到高压锅内灭菌。

5.倒平板：待培养基冷却到50OC左右时倒平板（如教材17图示）。

（二）纯化大肠杆菌

微生物接种方法常见的有平板划线法和稀释涂布平板法。

1.平板划线法
通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面
在数次划线后可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体称菌落。

2.稀释涂布平板法
（1）将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释
度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行
培养。
（2）在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物
将分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单
个的菌落。
（3）稀释涂布平板法操作过程分两个步骤，
即系列稀释操作和涂布平板操作。

系列稀释操作

(1)将分别盛有9mL水的试管灭菌并编号。

(2)用移液管吸取1mL培养的菌液，注入第二支试管中，轻压橡皮头，吹吸三次使之充分混匀。

(3)从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注入第三支试管中，重复步骤2，直至到第六支试管。

涂布平板操作

(1)将涂布器浸在盛有70％的酒精的烧杯中。

(2)取少量菌液（不超0.1mL），滴加到培养基表面。

(3)将沾有酒精的涂布器在火焰上引燃，火熄后冷却
8～10s。

(4)用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。

3.培养12h和24h后，观察到的实验结果相同吗？如果不同，请分析产生差异的原因？
培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同。随着时间的延长、菌落的不断生长，使菌落不断增大。

Answer 2

你好，可以用牛肉膏蛋白胨培养基（1000ml配方）：
牛肉膏：3-5g
蛋白胨：10g
NaCl：5g
水：加至1000ml
pH：7.0-7.2
121摄氏度灭菌20分钟
灭菌前加入琼脂20g即为固体培养基
手码不容易，谢谢！