Question

求助Western Blot实验条带没出现的原因分析及解决办法

Answer 1

一、Western Blot实验条带没出现的原因分析及解决办法 ：
原因分析 解决办法
1.一抗和二抗失效 1. 更换抗体；选择现用现配的工作液
2.一抗和二抗不匹配 2. 更换为同种同属的同亚型的抗体底物
3.发光液失效 3. 更换新的发光液
4.抗体染色不充分 4. 增加抗体浓度；延长孵育时间
5.被测样品中不含有目的蛋白质或者目的 蛋白质含量太低 5. 设置阳性对照。确定标本中是否含有目的蛋白质；
增加样品 的上样量。
6. 溶液中有辣根过氧化物酶的抑制剂 6.用透析和超滤除去所用溶液中如叠氮化钠之类的抑制剂
7.抗体活力降低 7.在抗体活力保存时间内使用抗体；工作液现用现配

二、WB出现白斑是因为转膜过程有气泡存在；或者抗体的分布不均匀，孵育抗体时要使用摇床。
三、剪好的PVDF膜在使用前需要甲醇里泡1-2min，在零度的转膜液中孵育3-5min。

四、一抗与二抗的专一性识别检测，就是蛋白质-蛋白质相互作用检测，方法很多，免疫共沉淀、Pull down、MADLI-MS、能量转移、分子筛层析等。