Question

如何从血清中提取RNA

Answer 1

血液（全血，也就医学上说的外周血）中RNA的含量很低，1ml一般在3ug左右（1-7ug）。一般是处理抗凝血液。
像以上全血的RNA提取有两种思路：
1）直接处理抗凝的全血，即加入如Trizol的裂解液直接往下做。此方法有个缺点：处理的体积血液体积有限，一般1ml Trizol处理100ul血液，最多不超过200ul.
2) 先去除血液中的红细胞分离出其中的白细胞（即淋巴细胞），然后提取白细胞的RNA。此方法的缺点：只能提取得到淋巴细胞的RNA，血液中游离的如病毒RNA无法提得。

Answer 2

血清RNA提取，biog的具体操作步骤如下：

1. 请自行准备：无水乙醇、无RNA酶1.5mL离心管。2. 取出洗涤液，按以下操作：a) 洗涤液A：21mL加入9mL无水乙醇；35mL加入15mL无水乙醇；42mL加入18mL无水乙醇。b) 洗涤液B：9mL加入21mL无水乙醇；15mL加入35mL无水乙醇；18mL加入42mL无水乙醇。c) 配制好的洗涤液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。3. 取无RNA酶的1.5mL离心管，加入200μL样本，4μLRNA Carrier混合均匀，再加入300μL 裂解液及20μL 消化液，漩涡震荡10秒，充分混匀，56℃水浴10 分钟至完全裂解。4. 加入1000μL无水乙醇，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响RNA的提取与后续实验。5. 将吸附柱放入收集管内，将760μL上述溶液转入吸附柱内，静置2 分钟，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液.6. 将剩余760μL溶液转移至吸附柱内，重复步骤5。7. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液A至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。8. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液B至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。9. 将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 4℃离心2 分钟，离去残留的洗涤液。10. 取出吸附柱，放入新的无RNA酶的1.5 mL 离心管内，加入30-50μL 洗脱液，静置3 分钟，12,000 rpm 4℃ 离心2 分钟，收集RNA溶液。11. -70℃保存，或直接用于下一步实验。

Answer 3

现在我们做实验大多不用繁琐的手提方法了，BIOG cfDNA Easy Kit可以用于提取血清中的RNA

Answer 4

我的实验是从血清中提取microRNA, 用过biog的，结果还可以。