Question

双荧光素酶实验原理是什么？

Answer 1

双荧光素酶实验原理：

利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。

然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣的调控元件的影响。

同时，为了减少内在的变化因素对实验准确性的影响，将带有海肾荧光素酶基因（Rinilla luciferase)的质粒作为对照质粒与报告基因质粒共转染细胞，提供转录活力的内对照，使测试结果不受实验条件变化的干扰。

荧光素酶报告基因是指以荧光素（luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶（fireflyluciferase)活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光（bioluminescence)。

Answer 2

双荧光素酶的实验原理是利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特性，一般将萤火虫荧光素酶（FLuc）作为报告基因，海肾荧光素酶（RLuc）作为内参基因。构建报告基因质粒，经过细胞转染与裂解，经荧光测定仪检测该报告基因系统中释放的生物荧光，从而反映基因是否存在靶向互作。