Question

western-blot试验后得到了样本的灰度值，请问怎么算出样本蛋白的实际含量

本人不太会查资料，我的试验是要找出样本中是否含有一种蛋白，所以用了wb法，得到的试验报告中已经算出了灰度值，是具体数字，弱问，我要怎么算出蛋白的具体含量呢？没有分了，请好心人帮帮忙
写错了，已知样本中含有此蛋白，试验是要知道蛋白的含量，求指教，谢谢

Answer 1

Western-blot是一种半定量的检测手段。
个人认为如果要通过灰度值来计算蛋白浓度，那就是和内参来做对比，因为内参的浓度是已知且单一条带的蛋白样品。通过待测样品盒内参样品灰度值做对比可以算出待测样品大概的浓度。
个人意见，仅供参考，因为一般检测蛋白含量的做法都是通过BF，BCA，Lowry之类的检测方法来测的。

追问

谢谢，请问是蛋白灰度值做分子，内参值做分母吗？

谢谢，请问是蛋白灰度值做分子，内参值做分母吗？

追答

就是列个等式么
比如蛋白灰度值/内参灰度值=蛋白浓度/内参浓度
就蛋白浓度是X，其他都是已知值，就可以求出X的值了

追问

十分感谢前辈，这是我的数据截图，其中的GAPDH是什么呢？如果我要算出蛋白浓度是不是把灰度值做分子，GAPDH做分母就可以了呢？白天忘记看了 请在指导一下吧

追答

GAPDH就是内参啊，甘油醛-3-磷酸脱氢酶，如果是上样30微克。那么蛋白量就等于蛋白灰度值乘以30除以内参灰度值

追问

前辈是说的上样，是实验报告上说的吗？如果是80微克，比如我要算A7的p38蛋白的含量，就是A7的灰度值5928.619*30/10349.57（A7的内参值）吗？