PCR反应的三个步骤是什么?
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标准的PCR过程分为三步(如图所示):
1.DNA变性(90℃-96℃):双链DNA模板在热作用下,
氢键断裂,形成单链DNA
2.退火(复性)(40℃-65℃):系统温度降低,引物与
DNA模板结合,形成局部双链.
3.延伸(68℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右最佳的活
性)的作用下,以dNTP为原料,从引物的5′端→3′ 端延
伸,合成与模板互补的DNA链.
每一循环经过变性、退火和延伸,DNA含量既增加一倍.
现在有些PCR因为扩增区很短,即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成,因此可以改为两步法,即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行,以减少一次升降温过程,提高了反应速度.
1.DNA变性(90℃-96℃):双链DNA模板在热作用下,
氢键断裂,形成单链DNA
2.退火(复性)(40℃-65℃):系统温度降低,引物与
DNA模板结合,形成局部双链.
3.延伸(68℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右最佳的活
性)的作用下,以dNTP为原料,从引物的5′端→3′ 端延
伸,合成与模板互补的DNA链.
每一循环经过变性、退火和延伸,DNA含量既增加一倍.
现在有些PCR因为扩增区很短,即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成,因此可以改为两步法,即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行,以减少一次升降温过程,提高了反应速度.
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