Question

小鼠骨髓细胞染色实验中有哪些材料可用作制备染色标本,其基本特性是什么

Answer 1

【基本原理】

在真核生物中, 染色体的数量和形态具有物种的特异性, 迄今一直可以此作为物种分类的基本依据之一。染色体作为遗传物质-DNA 的载体, 对生物的遗传、变异、进化和个体发生, 以及细胞的增殖和生理过程的平衡控制等都具有十分重要的意义。每一个物种的细胞一般都有一定数目、形状和大小的染色体。将体细胞核中全部染色体按照其大小、着丝粒位置，以至带型有序地排列起来，此模式图象排列即为核型（karyotype）或染色体组型。核型分析均是以中期染色体为标准，对制作出的染色体标本进行照相以获得染色体的显微图象，并将其剪裁排列即成。华裔学者庄有兴（Joe Hin Tjio）和瑞典学者A.Levan 合作, 利用低渗法研究胎儿肺组织的染色体标本制做方法，终于在1956 年首次确定了人类的染色体数目是46 条，而不是前人所主张的48 条，这为后来的人类核型研究奠定了基础。

自身正处于活跃分裂状态或用植物血球凝集素（phytohemagglutinin，PHA）处理后处于分裂状态的组织或细胞，均可用于染色体标本的制作与分析。在正常动物体中，精巢和骨髓均为是活跃分裂的组织，可不经PHA 处理直接用来制作染色体标本。但在取材方面，精巢又比骨髓要简易一些。

骨髓细胞具有高度的分裂活性，经秋水仙素或秋水酰胺处理后，使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，再经低渗处理、固定、滴片、染色等步骤，可制作较好的骨髓细胞的染色体标本。对于骨髓染色体标本的制作，一般包括以下几个要点：1）用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期，使中期染色体停留在赤道面处；2）用低渗法使将细胞膨胀，再经固定液固定，尽可能使染色体的结构保持不变，在滴片时细胞被胀破，使细胞的染色体铺展到载片上；3）空气干燥法可使使细胞的染色体在载片上展平，经Giemsa 染色后便可观察到染色体的显微图象。

【方法步骤】

1．取青蛙，于实验前7~8 小时，腹腔注射秋水仙素（按每克体重6 微克）。

2．处死青蛙，取其股骨及肱骨，去掉骨上的肌肉。

3．用骨剪将股骨头的两端剪去,用注射器吸取1mL0．075 mol/L 氯化钾溶液；注入骨髓腔将骨髓洗出于刻度离心管中。

4．吹打分散细胞,静置 20分钟。

5．离心机离心(2000 转／分钟)5分钟去上清.

6|. 加入新配制的卡诺固定液1ML固定20分钟（甲醇3：冰醋酸1）。用吸管轻轻混匀进行预固定，然后以2000 转／分钟离心5 分钟，弃去上清液。

7．加入新配固定液0.5毫升（视细胞多少而定）制成细胞悬液，用吸管吸取细胞悬液，滴2～ 3 滴于预冷的载玻片上，并吹散细胞。将载玻片在酒精灯上微烤。再用电吹风将标本吹干

（或空气干燥）。

8．滴Giemsa 染液6～8 滴于载玻片上，室温下染色3 分钟左右，自来水冲洗，用电吹风吹干（或空气干燥）。（注：鸡染色体的制作方法基本相同）。

9．将制好的玻片标本在低倍镜下观察，然后换高倍镜找到分散良好的分裂相，再转油镜仔细观察。

【实验结果】

在显微镜下，染色体被染成紫红色，胞浆完全不着色。对于分散好的染色体, 其间相互散开, 短臂收缩适中, 二条姐妹染色单体大致平行分离, 着丝粒清晰可见。小鼠的染色体数为40 条，多为端部和亚端部染色体，只有2 对亚中部着丝粒染色体。

[附] 染色体标本制做质量不佳的可能原因：

1．秋水仙素用量太多或处理时间过长，都会导致染色体的过分缩短或着丝点迅速裂解，最终使染色体被破坏或溶解。

2.低渗处理极为重要，低渗液的量、处理时间均与细胞的数量有关。低渗过度时, 细胞会破裂，成膜上浮；不足时则染色体积在一起，因此，低渗处理直接影响染色体分散之好坏。

3.离心速度太高或离心时间过长。细胞团块不易打散；速度过低或离心时间过短, 使 细胞不易沉降，会失去大量分裂相。

4．固定液要随用随配, 固定彻底后再打散细胞团块, 否则细胞容易破碎, 染色体分散亦受到影响。

5．载玻片如有油脂或冷却不够亦影响的铺展。

Answer 2

在明视野下，若能看清的话就不要染色了。因为在无法观测清楚时，才会染色。通常染色剂会影响微生物的活性，更多的是使细胞死亡。即使是活性染料也有一定的影响。 根据经验 不染色完全可以看见显微结构 细胞膜 细胞壁 液泡 核 基本可以看见 叶绿体隐约可以看见 当然分辨率和光圈大小需要调整到最佳状态 鞭毛可以隐约看见 霉菌放线菌细菌的形态当然是不染色完全可以看 如果想看更细致些 比如线粒体 高尔基体 核膜 微囊体 膜泡等亚显微结构 需要用特定的分子染料进行染色再进行观察 如果你不需要做活体实验而只是观察的话，染色吧，清晰度好一些。