Question

MTT法中可以直接加DMSO吗？

在做悬浮细胞的MTT法中，加完MTT4小时后，能否不离心去上清，直接加DMSO？我用的分析纯DMSO,查的资料中说分析纯DMSO不会和MTT发生反应，那DMSO会和培养液有反应吗？为什么做MTT法德都要去上清后再加DMSO?

Answer 1

首先说，为什么要弃去含有MTT的培养基，因为培养基是水溶性的，而活细胞内琥珀脱氢酶与MTT反应生成的甲瓒是不溶水的，DMSO是脂溶性的，是为了甲瓒充分溶于ＤＭＳＯ，因此需要将含有MTT的培养基去除，否则会十分影响甲瓒在ＤＭＳＯ中的溶解性。

如果你不想弃去上清，那你可以不用ＭＴＴ，而用ＷＳＴ－１。WST-1是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。WST-1是MTT的一种升级替代产品。

ＷＳＴ－１生成的橙黄色的formazan是溶于水的，因此可以不弃上清。千万别去掉哦，生成的甲瓒就在培养基里，不用加ＤＭＳＯ，直接上酶标仪检测就行了。

ＷＳＴ法简单，但是价格要比ＭＴＴ贵。
参考网址on http://www.bio1000.com/zt/focus/dmso.html