在培养转基因植物的研究中,卡那霉素抗性基因常作为标记基因…答案
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2013-07-17
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(同一种)限制酶、DNA连接酶(缺一不可) ⑵Ca2+ 感受 将重组质粒和感受态细胞 ⑶脱分化 再分化 卡那霉素 ⑷mRNA
解析:基因表达载体的构建中,需用同一种限制酶切割目的基因和质粒;用DNA连接酶把目的基因和运载体质粒连接成重组质粒。将其导入土壤农杆菌时,首先用Ca2+处理土壤农杆菌细胞,使其转变为一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态──感受态细胞;其次,将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合,在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子,完成转化过程。获得含有目的基因的植株后,一般采用植物组织培养的方法让其在短时间内大量增殖;若检测,则放在含有卡那霉素的选择培养基上进行选择培养。若利用DNA杂交技术检测再生植株中的抗虫基因是否转录,一般带有标记的基因做探针与m RNA杂交,如果显示出杂交带,则表明目的基因转录除了mRNA。
解析:基因表达载体的构建中,需用同一种限制酶切割目的基因和质粒;用DNA连接酶把目的基因和运载体质粒连接成重组质粒。将其导入土壤农杆菌时,首先用Ca2+处理土壤农杆菌细胞,使其转变为一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态──感受态细胞;其次,将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合,在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子,完成转化过程。获得含有目的基因的植株后,一般采用植物组织培养的方法让其在短时间内大量增殖;若检测,则放在含有卡那霉素的选择培养基上进行选择培养。若利用DNA杂交技术检测再生植株中的抗虫基因是否转录,一般带有标记的基因做探针与m RNA杂交,如果显示出杂交带,则表明目的基因转录除了mRNA。
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