Question

高中生物题，基因工程，急急急

利用转基因奶牛乳腺生物发生器生产人的生长激素，需要构建一种能高水平表达的表达载体，选择合适的基因启动子至关重要。由于无法由基因表达产物推知启动子的碱基序列，运用PCR技术单独克隆启动子存在困难。科研人员经过长期研究，终于发明了下图所示的一种克隆启动子的方法。请分析回答：

请回答：
（1）扩增过程中，在第 ▲ 轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。
答案为三，为什么
（2）过程⑤中克隆的启动子与外源基因编码序列连接时，原引物a所在的P片段的碱基对数目应是3的整数倍，目的是 ▲ 。

Answer 1

(1)

(2)

保证外源基因编码序列编码正确的氨基酸序列

Answer 2

（1）第三轮

（2）保证外源基因编码序列编码正确的氨基酸序列
解析：本题以克隆特定启动子为背景，考查基因工程操作及相关知识，结合图示弄清发明思路是关键。PCR过程中，需要根据模板DNA已知的碱基序列设计引物，但由于启动子部分不能被转录，最终体现在蛋白质分子的氨基酸序列中，导致启动子序列的克隆困难。人们可以根据组成蛋白质的肽链首、尾氨基酸序列推测基因编码序列的首、尾碱基序列，进而设计引物，科学家发明了将启动子序列置于克隆DNA片段中间、已知序列的基因编码序列位于两端的方法，实现对启动子的克隆，是该发明的主要思路。由于翻译过程中以“三联体”为阅读单位，为保证外源蛋白基因能够正常表达，保留在克隆启动子后的原基因片段（图中P）的碱基数必须是3的倍数，以保证转录形成的mRNA指导合成的蛋白质能够保留正常的氨基酸序列。