Question

用流式细胞仪检测各个象限的意义

本人用流式细胞仪检测了肿瘤细胞的用药后的凋亡情况，四个象限的意义分别是什么，谢谢！

Answer 1

左下为正常细胞，左上为坏死细胞；右上为晚期凋亡细胞，右下为早期凋亡细胞。

检测CD4和CD8，应该还要同时染色CD3. 先选中CD3阳性的细胞（T细胞），把T细胞在CD4/CD8的散点图上再显示，可以分为四个象限。

分别代表CD4阳性，CD8阳性，双阳性，和无染色的。正常情况下，是不应该有双阳性和未染色的，也就是说你的细胞应该只显示在4个象限的其中的两个。其他的两个最多只是一些背景的杂信号。代表T细胞的两个亚群。

流动室和液流系统

流动室由样品管、鞘液管和喷嘴等组成，常用光学玻璃、石英等透明、稳定的材料制作。设计和制作均很精细，是液流系统的心脏。样品管贮放样品，单个细胞悬液在液流压力作用下从样品管射出；鞘液由鞘液管从四周流向喷孔，包围在样品外周后从喷嘴射出。为了保证液流是稳液，一般限制液流速度υ<10m/s。由于鞘液的作用，被检测细胞被限制在液流的轴线上。流动室上装有压电晶体，受到振荡信号可发生振动。

以上内容参考：百度百科-流式细胞仪

Answer 2

要看你是什么染料标记了例如临床上，最常用的荧光染料主要有三大种： FITC、PE和PeCy5。肉眼观察，FITC为绿色；PE为橙色； PeCy5为红色。它们都在488纳米被激发。检测波长分别是：FITC是525纳米；PE是575纳米；PeCy5是675纳米。实际上，荧光的变化是在一个范围内。这时候，荧光之间有可能重叠，需要进行荧光补偿的调节。所以可以看到，例如FITC和PE、PI，它们发出的波长有交叉，要想检测FITC，需要把PE和PI的信号去掉，也就是荧光补偿需要调节的意义。在临床上也是常常用两种荧光染料直接染色细胞，从而可以得到细胞更多的信息。例如在检测B细胞和T细胞的时候，可以用CD3和CD19同时加在试剂，可以同时与细胞进行孵育。我们将CD3标记成FITC，CD19标记成PE。有的淋巴细胞只表达CD3，有的细胞表达CD19；这样，我们就可以检测到CD3阳CD19阴的细胞就是T淋巴细胞；而CD3阴CD19阳的细胞就是B淋巴细胞。这样我们能够得到更有效的数据分析。

Answer 3

左下为正常细胞，左上为坏死细胞；右上为晚期凋亡细胞，右下为早期凋亡细胞。