Question

贴壁细胞怎样进行传代？

Answer 1

贴壁细胞细胞在培养瓶长成致密单层后，继续生长的空间不足，培养基中的营养成份也消耗较多，同时代谢废物也有较多堆积，需要分瓶培养，对细胞进行传代扩增。

贴壁细胞传代标准步骤：
一、准备工作
1. 废液缸
2. 吸管
3. 新鲜培养基
4. 消化液
5. 细胞洗涤液
6. 离心管
7. 油性记号笔/普通签字笔
8. 实验记录本
二、实验步骤
1. 打开层流，打开层流间和超净台的紫外线灯，离心管、废液缸和吸管需同时照射；
2. 把水浴锅调整到37℃ 并使其稳定；
3. 将消化液和新鲜培养基放置到水浴锅中，注意防止水面高于瓶肩，10ml液体保持3分钟，（100ml液体保持10分钟， 200ml液体保持15分钟，500ml液体保持20分钟），间或摇动；
4. 着无菌服装，帽子，口罩和手套
5. 用75%乙醇消毒培养基瓶外壁，放置到超净台上；
6. 将细胞培养瓶取出，用75%乙醇棉球消毒瓶底；
7. 用吸管吸弃旧培养基，更换吸管，于非细胞培养面加入等量细胞洗涤液，轻轻摇晃使其覆盖整个瓶底，吸弃细胞洗涤液，更换吸管，重复洗涤一次；
8. 加入少量细胞消化液，37℃镜下观察消化；
9. 当细胞明显回缩后，加入少量新鲜细胞培养基终止消化，轻柔吹打底面2~3次后收集所有液体入新离心管中；
10. 1200转/分钟离心8分钟，弃上清，细胞沉淀用适量新鲜培养基悬浮；
11. 加入到新培养瓶中，标记瓶号与细胞批次
12. 记录实验过程和细胞培养瓶号。

Answer 2

以下介绍了贴壁细胞和悬浮细胞传代的一般流程,为自己所用的细胞系传代时，建议您严格遵守实验中所有产品附带的操作说明,偏离某种细胞所需的培养条件会导致细胞表型异常，甚至培养完全失败。
　　(1)传代前准备
　　用具紫外照射消毒(30min)：无菌培养瓶，15ml离心管，移液管，移液枪，枪头。
　　倒置显微镜下观察细胞形态，确定细胞是否需要传代及细胞需要稀释的倍数。
　　(2)胰蛋白酶/EDTA消化
　　从培养箱中取出待传代的细胞(将盖子拧紧)，75%酒精进行瓶口消毒，吸掉培养细胞的旧培养基，PBS缓冲液洗去残留的旧培养基，按25m2/ml消化液比例加入消化液，消化液中EDTA浓度视不同细胞而定。放入显微镜下观察，待所有细胞变圆后立即拿入超净台内，加入6ml细胞完全培养基中止消化，消化时间为1-5min，具体以细胞而议，采用无菌吸管轻轻吹打细胞表面，注意吹打全部培养表面，可以按照先左右吹打，后上下吹打的方式，取所有的细胞悬液放入干净的15ml离心管内，每分钟1000rpm，RT5min。
　　(3)制备细胞悬液及培养
　　吸取上清液丢弃，不要吸到底部的细胞沉淀，向离心管内的细胞沉淀加入适量完全培养基，吹打混匀，吹打过程中尽量不要产生气泡，以1:2的比例进行分瓶。
　　(4)结果观察
　　第二天观察细胞情况，细胞培养换液时间一般2-3天。
　　(5)注意事项
　　1 严格无菌
　　2 适度消化：把握好消化液的最佳浓度
　　3 吹打细胞动作要轻柔

Answer 3

你说的是动物细胞培养吗，如果是就要用胰蛋白酶处理，把细胞分散，然后把分散的细胞分成几个培养基中培养

Answer 4

贴壁细胞细胞在培养瓶长成致密单层后，继续生长的空间不足，培养基中的营养成份也消耗较多，同时代谢废物也有较多堆积，需要分瓶培养，对细胞进行传代扩增。
对于贴壁不太紧的细胞如293，可以直接吹散后分瓶。而对于贴壁较紧的细胞如CHO，则需要以胰酶消化后再吹散分瓶，一般过程为 （以下操作均按无菌操作的要求进行）：
将长成致密单层细胞的细胞瓶中原来的培养液弃去； 加入0.25％胰酶溶液，视细胞瓶的大小加入体积为0.5ml或更多，以使充分浸润； 一般消化时间约为1至3分钟，肉眼观察瓶壁半透明的细胞层，当见到出现细针孔空隙时，弃去胰酶溶液，并加入适量的细胞培养液终止消化； 视实验要求分入多瓶继续培养，一般为一传二到一传四的比例。
生物帮上面有这方面的介绍， http://www.bio1000.com/industry/shibie/ 生物识别技术动态,生命科学产业动态。