Question

基因工程中的质粒

1、目的基因拼接到质粒上后要怎么表达，不是只有核染色体中DNA才可以表达基因吗？

2、如果质粒上的目的基因要整合到DNA中，那么整合过程是如何进行的？
3、基因工程第四步为目的基因的检验与测定，那么是如何进行的？
4、作为运载体的条件中有一个为有一定的标记基因，那么在操作过程中，如何检测标记基因？

Answer 1

1、目的基因拼接到表达载体（也就是含有表达元件的质粒）上，转化至宿主菌内就可以表达，是独立核染色体之外的。只要符合表达的条件，就可以表达，不一定非是核染色体上的基因。
2、一般情况下，质粒上的基因无需整合至核染色体上，也有一些宿主（如毕赤酵母），需先将表达载体线性化，再转化至酵母体内。整合的方式是随机的（插入、替代等），是通过同源重组进行的。
3、目的基因的检验与测定可以通过检测是否有目的蛋白表达的方法；也可以PCR验证。
4、标记基因是用来筛选阳性转化子的，一般为抗性基因，阳性转化子可以在含有相应抗生素的筛选平板上生长。

Answer 2

质粒是可以独立于染色体以外的独立复制表达的遗传物质，而且也不是只有核染色体DNA才可以表达。质粒上的目的基因不用整合到染色体中。检测质粒上是否含有目的基因又很多办法，酶切、PCR等等。检测标记基因一方面可以看表达，比如如果标记基因是绿色荧光蛋白的话可以激发荧光，另一方面也可以像检测目的基因一样检测标记基因。

Answer 3