Question

假如你根据病毒的基因组序列，通过生物信息学分析推测该基因组编码一个新的开放阅读框（ORF），请设计

假如你根据病毒的基因组序列，通过生物信息学分析推测该基因组编码一个新的开放阅读框（ORF），请设计实验证实该开放阅读框。

Answer 1

1,首先将改ORF放入NCBI、GENEBANK进行比对，如果有相同或者相近的基因被报道，则能够证实该编码框，不需要再特意的去做实验。
2，如果查找不到相关基因或者该基因未被报道，则可以进行克隆，转化大肠杆菌进行表达进行验证。

追问

请问内容是什么呢？呢？

追答

呃，什么意思，没明白

追问

您的回答就只有1首先啊，接下来的内容呢？

追答

1,首先将改ORF放入NCBI、GENEBANK进行比对，如果有相同或者相近的基因被报道，则能够证实该编码框，不需要再特意的去做实验。
2，如果查找不到相关基因或者该基因未被报道，则可以进行克隆，转化大肠杆菌进行表达进行验证。

追问

转化大肠杆菌进行表达验证的过程可不可以具体讲一下呢？感激不尽！

追答

1，根据你ORF序列，设计引物进行PCR克隆

2，克隆产物与表达载体进行酶切连接，连接后转入大肠杆菌感受态细胞
3，转化子验证正确无误后，在IPTG诱导下进行表达，表达结束后进行蛋白电泳
4，纯化分离表达的目的蛋白，可以进行氨基酸晶体结构分析
注：以上是大肠杆菌表达的大略步骤，你可以查找文献，有详尽的步骤
PS：目前很多数据库都可以进行ORF-Finding，可以进行编码蛋白预测