Question

基因工程中切割载体和含目的基因的DNA片段是需使用同种限制酶是为什么？是怎么切割怎么连的，能不能简述

基因工程中切割载体和含目的基因的DNA片段是需使用同种限制酶是为什么？是怎么切割怎么连的，能不能简述一下基因工程的主要步骤？

Answer 1

所用的同种限制酶是限制性内切酶，也叫做内切酶，至于具体用哪个内切酶，要根据你要切的序列进行分析，分析的软件很多，比如OMIGA，MEGA，primer premier......
至于怎么切割怎么连，下面已经说的很清楚了，简说，就是识别-切割-连接。

基因工程的主要步骤：
1.目的片段的分离与合成，获得目的片段
2.目的片段与载体连接（载体有两种，一种叫做克隆载体，为了大量获得该片段，并对在片段在基因层面进行研究；另一种叫做表达载体，为了将目的片段翻译成蛋白，对蛋白进行研究）；
3.含有目的片段的载体导入宿主细胞内
4.对宿主进行检测和筛选，主要检测是否导入成功，和导入的基因是否你所要的；

Answer 2

限制性内切酶识别特定的酶切位点，作用于DNA分子链上磷酸二酯键，同种限制酶才能切割出相同的粘性末端。连接时，相同的粘性末端通过碱基互补配对，在DNA连接酶的作用下形成磷酸二酯键。
基因工程的主要步骤：1、目的基因的获得；2、目的基因与表达载体的连接；3、表达载体向宿主的转化。

Answer 3

这个是分子克隆最基本的原理，建议还是认真读书，会了解得更透彻些。

Answer 4

是用同种限制酶，让他们的末端相同，碱基配对

追问

我记得还有个什么要用不同的限制酶防止他自身环化是怎么回事？

追答

应该是酶切位点不能在标记基因上，防止破坏他