Question

.下图是含某目的基因的DNA片段,据图回答下列问题. (1)根据图示可知,若用 EcoRI和SmaI 限制酶切割,则此DNA

.下图是含某目的基因的DNA片段，据图回答下列问题。

(1)根据图示可知，若用 EcoRI和SmaI 限制酶切割，则此DNA片段可有 个限制酶切割位点，切割后共有 种 个切割末端。
(2)EcoRI限制酶切割后形成的末端是 末端，在图中用笔标出EcoRI限制酶的切割部位。
(3)如果EcoRI限制酶切割形成的目的基因片段要导入受体细胞，最常用的载体是 。
(4)要获取需要的转基因生物最核心的操作步骤是 。
我要解析！

Answer 1

EcoRI的切割序列是
—G↓AATTC—
—CTTAA↓G—
并且切下来的末端不是对仔拿齐的，这样的末端是粘性末端
SmaI 的切割序列是
CCC↓GGG
GGG↑CCC
切下来的末端是对齐的，这样的末端是平头末端
（1）对照着序列，可以看到这段序列上分别有EcoRI和SmaI 各一个切割序列，并且这两种酶切割后留下的末端是不同类型的末端，所以答案是2 2 4
*这里要特别强调一下，在SmaI 下游有一段序列式CTTAAG，很容易误认为它是EcoRI的切割位点，但是请注意念运搭限制酶的切割也是有方向的，悄激请注意这一段序列的方向。
（2）粘性末端 切割部位已经给你给出来了
（3）质粒做载体是很常见的
（4）这个我不是很确定，我觉得目的基因导入并能够成功表达的，才算是成功的，但是大部分细胞要么没有导入成功，要么导入了不表达，所以我觉得核心操纵应该是筛选

追问

答案是3 2 6 你漏看了一个 最后一问答案是基因表达载体的构建

追答

你确定这是正确答案？下游那一个方向是反的，我特意还查过，这样的序列限制酶识别不了

至于你说的表达载体的构建，可能吧，我好长时间没有接触高中生物了，这些书面用语可能确实没有答案要求的那样精准

追问

答案确实是3 至于顺序反了不能识别 老师没讲过 可能高中不在意这些细节吧 但是真谢谢你 打了这么多字

追答

采纳不采纳我无所谓，但有些观点必须坚持
老师讲没讲，不等于明知错了还要去犯错
你如果不相信我，可以看这个帖子
http://zhidao.baidu.com/link?url=OJ_EiblR8mVm4-JBJqV9ue7etzDC_keFoJlZaHRkuWoAAUx2l9PUN3ixQxrMeR1vhM5L6SUtZgg_ipRwmI_d9q

追问

可是满意回答里也说因为它识别的是双链DNA，所以 不用在这个识别顺序上计较。且这是外省题，我们省连EcoRI和SmaI的识别序列高考都不要求记，更不要说识别序列顺序的正反了。我想掌握的知识只想为高考服务，所以我目前只能反对你的看法。但我没说你的看法是错的，只是我们没有要求掌握

Answer 2

1. 3个，2种

2. 黏性末端  -G|AATTC- （自己找吧）

3. 质岩慎粒

4. a.目的片段的获得；b.目的片段与载体连接；c.连接目的片段的载体导入宿主细胞；d.对导入目的档尘片段的载体粗蠢敬进行检测

EcoRI的切割识别是-G|AATTC- SmaI的识别切割位点是 -CCC|GGG-所以你数数，一共三个；EcoRI这种形态叫做黏性末端，SmaI的末端叫做平末端，所以2种

EcoRI的来源从名字来看就是埃希氏大肠杆菌，所以，大肠杆菌重用的载体是质粒。

追问

有些问题漏回答了 但是还是解决了我的疑问 谢谢

追答

哦，第一题那个，3个切割位点就是6个末端嘛...