Question

请问各位大神，DNA胶回收电泳有目的条带，但是测OD值时去测不出来？请问这究竟是什么原因？非常感谢！

菌落PCR之后进行胶回收的！亮的两条带是回收之前，其他都是回收之后电泳结果。

Answer 1

一般Marker中亮的条带是100ng,其他的条带是50ng.可以看到你回收之后的条带亮度估计在10ng~30ng左右，如果你的上样体积为10ul，则浓度应该是1ng~3ng/ul,这个浓度是很低的，一般的分光光度计都是测量不出的。
如果做克隆，可以不用管OD值。还有你的胶回收效率有点低，这个是问题关键。

追问

非常感谢您！但是如果测序这个浓度肯定是不行的吧，回收率太低怎么办？提高电泳上样量还是怎么办？

追答

测序是可以提供质粒的，菌液也可以，你提供上下游引物就可以了。你直接把菌落PCR阳性的克隆取扩大培养，直接送去测序，可以绕过胶回收这一步。

追问

我是想直接菌落pcr之后胶回收送公司测序，没有做克隆

追答

你现在不是浓度低嘛，你把菌落PCR还剩余的菌液接种到LB培养基扩大培养，然后把你做菌落PCR的引物和培养好的菌液送去测序不就可以了。

追问

谢谢！这确实可以，但是我的样本很多，这样是不是很麻烦，费用是不是也要高些？有没有办法可以让回收率提高？

追答

我都是直接送菌液测序的，一般也都这么测吧，倒是很少听说酶切回收测序的。而且摇菌要比酶切回收简单吧，节省了内切酶的费用，测序送质粒和片段应该都是一样的价格。你实在想这么做，可以直接PCR了拿去测序，不用回收。
至于增加回收效率，这个如果你完全按照说明书上做的话还不行，那就得换试剂盒。