比较elisa和facs的异同点
2016-12-30 · 专注各类elisa试剂盒、血清抗体
南京金益柏生物科技有限公司
FACS分选CD4+CD25 + T 细胞需要具分选功能的流式细胞仪.而且保证无菌的操作环境.
MACS分选CD4+CD25 + T 细胞方法:
CD4+CD25+T细胞分选实验步骤
1、 样品准备
研磨淋巴结和脾脏组织，获得单细胞悬液，其中，淋巴结组织无需红细胞裂解液处理，脾脏细胞需要红细胞裂解液处理，并用缓冲液洗涤两次。
2、 标记非特异性CD4+T及荧光标记CD25
2.1 细胞计数，离心：1000rpm，3min
2.2 40ul Buffer/107细胞
2.3 10ul 混合抗体/107细胞
2.4 充分混合，4-8℃，孵育10分钟
2.5 加30ul Buffer，20ul Anti-biotin microbead 和10ul CD25-PE/107细胞
2.6 混合后再孵育15分钟（避光）
2.7 1-2ml Buffer洗涤，离心
2.8 500ul/1025*108重悬，过LD柱子
3、 LD柱子分选
3.1 固定LD柱子
3.2 2ml Buffer润湿柱子
3.3 加入细胞悬液
3.4 收集流出柱子的细胞，1ml Buffer洗涤两次，收集流出液体。
3.5 取下柱子，在另一管中打入柱子上结合的阴性细胞
4、 标记CD4+CD25+T 细胞
4.1离心CD4+T细胞
4.2 90ul Buffer/107细胞
4.3 10ul Anti-PE Microbead/107
4.4 混合细胞，避光孵育15分钟（4-8℃）
4.5 500ul/108重悬
5、 阳性分选
5.1 MS柱子用500ul Buffer润湿
5.2 加细胞悬液
5.3 500ul Buffer洗涤3 次
5.4收集过柱子的细胞到非CD4+T细胞的管中。
5.5 取下MS柱子，获得CD4+CD25+T细胞
5.6 MS柱子重复分选一次？？
6、 细胞计数，培养
6.1 送激光共聚焦观察细胞表面CD25表达丰度
6.2 细胞计数后，每2*104细胞混合后加入200ul 96孔培养板，在培养72小时结束前6小时加入3H-TdR，送同位素检测。
