Question

大学基因工程考试，有三道大题求高手解答！急求！

4.什么是CDNA文库？为什么通常不构建原核生物的CDNA文库。
5.常用的毕赤酵母宿主菌只要有GS115和KM71，其中GS115是MUT+表型，而KM71为MUTs表型，问mut+和muts在利用甲醇为碳源时有何无别？
6.如何利用切口平移法制备核酸杂交探针。

Answer 1

4.以mRNA为模板，经反转录酶催化，在体外反转录成cDNA，与适当的载体（常用噬菌体或质粒载体）连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段cDNA，并能繁殖扩增，这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。

原核生物没有POLYA尾，不易进行反转录。

5.Mut+能够快速利用甲醇为碳源，而Muts则不能利用甲醇为碳源。所以Mut+能够在含甲醇（MM)平板也快速生长，而Muts只能在含葡萄糖（MD)平板快速生长。

6.切口平移法(nick translation)是利用大肠杆菌DNA聚合酶I (E.coli DNA polymerase I) 的多种酶促活性将标记的dNTP掺入到新形成的DNA链中去，形成均匀标记的高比活DNA探针。其操作方法如下：
(1) 取1ug DNA溶于少量无菌双蒸水中，加入5?l距离大约10×切口平移缓冲液 ( 0.5mol/L Tris－HCl，PH7.2；0.1 mol/L MgSO4 ；1mmol/L二硫苏糖醇；500?g/mL牛血清白蛋白)，加入除标记物(如?-32 p-datp)外的其它三种dNTP(如dCTP，dGTP，dTTP)溶液，20mmol/L溶液各1?l。
(2) 加入100?ci(10?l)标记物溶液，加入无菌双蒸水至终体积为46.5ul,混匀，加入0.5ul稀释的DNaseI溶液，混匀；加入1ul(约5单位)E.coli DNA polymerase I，混匀。
(3) 置14-16℃反应1-2小时。

Answer 2

4，看高中生物选修三