链球菌属及其检验「微生物检验」
⒈分类
链球菌的分类方法尚未统一。常用下列两种方法。
⑴根据溶血现象：分为3类。
①甲型溶血性链球菌(α-hemolytic streptococcus)：菌落周围有1～2mm宽的草绿色溶血环，称甲型溶血或α溶血，该类菌又称草绿色链球菌，为条件致病菌。
②乙型溶血性链球菌(β-hemolytic streptococcus)：菌落周围有2～4mm宽的透明溶血环，称乙型溶血或β溶血，该类菌又称溶血性链球菌，致病性强，常引起人和动物多种疾病。
③丙型链球菌(γ-streptococcus)：菌落周围无溶血环，因而又称不溶血性链球菌，一般不致病。
⑵根据抗原结构：按链球菌细胞壁中多糖抗原不同，可分成A、B、C、D …等20个群。同群链球菌间，因表面蛋白质抗原不同又分若干型。如A群根据其M抗原不同，可分成约100个型;B群分4个型。对人致病的链球菌菌株，主要是 A群，多数呈现乙型溶血。
⒉细菌特性
⑴链球菌
① 形态染色 球形或椭圆形，直径0.5～1.0μm，链状排列，链的长短与细菌的种类和生长环境有关，在液体培养基中形成的链较长。无芽胞，无鞭毛。多数菌株在培养早期(2～4h)形成透明质酸的'荚膜。革兰染色阳性。
②分离培养 营养要求较高，培养基中需加入血液或血清、葡萄糖、氨基酸、维生素等物质。多数菌株兼性厌氧，少数为专性厌氧。在液体培养基中呈沉淀生长，在血平板上，37℃18～24h后可形成灰白色、圆形、凸起、光滑、直径为0.5mm～0.75mm的细小菌落，菌落周围出现不同类型的溶血环。 www.labdd.com
③生化反应 触酶阴性、一般不分解菊糖，不被胆汁溶解，这两特性可用来鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌。
④抗原构造 主要有三种：
蛋白质抗原：或称表面抗原。具型特异性有M、T、R、S 4种，位于C抗原外层。与致病性有关的是M抗原。
多糖抗原：或称C抗原。为群特异性抗原，位于细胞壁。根据C抗原的不同，将链球菌分为20群。对人致病的90%属A群。
核蛋白抗原：或称P抗原。无特异性，为各种链球菌所共有，并与葡萄球菌有交叉。
⑤抵抗力 不强，60℃30min即被杀死。对常用消毒剂敏感。乙型链球菌对青霉素、红霉素、四环素及磺胺类敏感。
⑵ 肺炎链球菌
① 形态染色 革兰阳性球菌，菌体呈矛头状、成双排列，宽端相对，尖端向外，在脓液、痰液及肺组织病变中亦可呈短链状，无鞭毛，无芽胞，在机体内或含血清的培养基中可形成荚膜。
②分离培养 营养要求高，在血平板上形成灰白色、圆形、直径为0.5mm～1.0mm的扁平菌落，周围有草绿色溶血环。培养时间长时可产生自溶酶。
③生化反应 多数菌株分解菊糖，胆盐溶解试验阳性和optochin敏感试验阳性，籍此可与草绿色链球菌相区别。
④抗原结构
荚膜多糖抗原 可将肺炎链球菌分为85个血清型。肺炎链球菌14型与人类A血型抗原有交叉反应。
多糖抗原 为各型菌株所共有。可被血清中一种C反应蛋白(C reactive protein,CRP)所沉淀。正常人血清中只含微量CRP，急性炎症者含量增高，故常以测定CRP作为诊断的依据。 检验地带网
M蛋白：为型特异抗原，与A群链球菌M蛋白类似，但抗原性不同，与毒力无关。
⑤抵抗力 本菌抵抗力弱，对一般消毒剂敏感。有荚膜菌株抗干燥力较强，在干痰中可存活1～2月。对青霉素、红霉素、洁霉素敏感。
⑥ 变异性 有荚膜的肺炎链球菌经人工培养后可发生菌落由光滑型向粗糙型，即S-R变异，同时随着荚膜的消失，毒力亦随之减弱。将R型菌落的菌株接种动物或在血清肉汤中培养，则又可恢复S型。
⒊临床意义
⑴化脓性链球菌
A群链球菌也称化脓性链球菌(pyogenic streptococcus)，致病力强，占人类链球菌感染的90%，能产生多种外毒素和侵袭性酶，如链球菌溶素O和S、M蛋白、脂磷壁酸、链激酶、链道酶、透明质酸酶等，可引起急性咽炎、呼吸道感染、丹毒、脓疱病、软组织感染、心内膜炎、脑膜炎及变态反应性疾病如急性肾小球肾炎、风湿热等，产毒株还可引起猩红热。链球菌型别多，各型间无交叉免疫，故常反复感染。
⑵乳链球菌
B群链球菌学名无乳链球菌(S.agalactiae)是新生儿败血症和脑膜炎的常见菌，对成人主要引起肾盂肾炎、子宫内膜炎等。
⑶ 肺炎链球菌
肺炎链球菌(S.pneumoniae)，俗称肺炎球菌(pneumococcus)，是大叶性肺炎、支气管炎的病原菌，还可引起中耳炎、乳突炎、鼻窦炎、脑膜炎等。其荚膜在细菌的侵袭力上有重要作用，此外溶血素、神经氨酸酶是主要致病物质。感染后机体可产生牢固的型特异性免疫。但因菌型多，可再感染其他型。 检验地带网
⑷ 草绿色链球菌
草绿色链球菌亦称甲型溶血性链球菌。是人体口腔、消化道、女性生殖道的正常菌群，可引起亚急性细菌性心内膜炎。
⒋微生物学检验
⑴链球菌
检验程序
链球菌检验程序见图9-2。
⑵标本采集 根据不同疾病采集不同标本。
⑶检验方法
显微镜检查 标本涂片革兰染色，镜检见链状排列革兰阳性球菌可初报。
分离培养 血液标本先增菌培养，脓液、咽拭可接种血琼脂平板并涂片染色镜检，初代分离需5%C02，35℃24h观察菌落性状。
⑵肺炎链球菌
①检验程序
②标本采集 根据病变部位采集不同标本。 检验地带网
③检验方法
显微镜检查： 除血液外，痰、脓液等均可直接涂片染色镜检。如发现革兰阳性矛头状双球菌，周围有较宽的透明区，经荚膜染色确认后可初报“找到肺炎链球菌”。
分离培养：血液、脑脊液先增菌，可呈均匀混浊，有绿色荧光。痰液、脓液可直接接种血平板，5%～10%CO2培养后，取可疑菌落进一步作optochin敏感实验、胆盐溶菌试验与菊糖发酵试验，以区别于甲型链球菌。
动物试验：小鼠对肺炎链球菌敏感，12～36h死亡。
荚膜肿胀试验：如遇同型免疫血清，则肺炎链球菌荚膜出现肿胀，为阳性。
④鉴定与鉴别
①Lancefield群特异性抗原鉴定：B群为无乳链球菌，F群为米勒链球菌，A、C、G群抗原不是种特异性抗原，还需根据菌落大小和生化反应进一步鉴定。
②PYR试验：化脓性链球菌为阳性。
③杆菌肽(bacitracin)敏感试验：化脓性链球菌为阳性，有别于其他PYR阳性的β溶血性细菌(猪链球菌、海豚链球菌)和A群小菌落β溶血性链球菌(米勒链球菌)。此法可作为筛选试验。
④VP试验：可鉴别A、C、G群β溶血的大、小两种不同菌落。
⑤CAMP试验：无乳链球菌能产生CAMP因子，它可促进金黄色葡萄球菌溶血能力，使其产生显著的协同溶血作用。试验时先将金黄色葡萄球菌(ATCC25923)，沿直径划线接种，再沿该线垂直方向接种无乳链球菌，两线不得相接，间隔约3～4mm。35℃孵育过夜，两种划线交界处出现箭头状溶血，即为阳性反应。本法可作为无乳链球菌的初步鉴定试验。
