Question

原核表达蛋白降解问题

鄙人苦逼研究生一名，最近在做原核诱导表达，我在第一次做的时候没有取上清只做了诱导后表达情况，WB结果很好，目的条带特异且亮。但是过了两天跑胶时发现没有那么亮了，但是上清中仍然杂出了目的条带，但是信号不强。接下来我便纯化了目的蛋白，第一次跑胶，没有做WB，跑出了特异的较亮的条带，只是条带比目的条带要大。接下来过了10.1（到下一次做中间隔了7天），问题便出现了，蛋白胶染色没有先前的条带了，且WB没有目的条带。（两次用的是同一批煮沸制备的样品）。哪位大侠帮帮忙啊

Answer 1

IPTG induction and His-tag protein purification?
问学长姊比较快