Question

高效液相色谱使用前，用什么冲洗管道先？？

高效液相色谱在使用前是不是需要先用15%到50%的甲醇溶液冲洗，再纯甲醇冲洗，才可以换实验所需流动相？？还是直接用15%到50%的甲醇溶液冲洗，然后就就可以换实验所需流动相？？ 使用后呢？？ 用什么冲洗管道，保存色谱柱？？？

Answer 1

一般来说，色谱柱的保存溶剂是纯甲醇或者纯乙腈。所以，使用前、后冲洗管路的溶剂和你所使用的流动相有关。如果你的流动相是纯有机相（纯甲醇、纯乙腈）那么使用前直接用流动相冲洗就好。如果你的流动相是有机相和水相的混合溶液，那么冲洗的时候要有个浓度梯度。就像你说的先用15%到50%的甲醇溶液冲洗，再纯甲醇冲洗。结束后的冲洗也是一个道理。它主要的意思就是防止缓冲盐的析出，其他没什么大问题。

Answer 2

前提条件是使用的反相色谱柱（C8、C18及其衍生等），不知道你用的什么柱子
1、一般使用前用80%的甲醇冲洗20倍（推荐值）柱体积，应考虑柱前仪器的死体积（约5-10ml），可以不接柱子大流速3-5ml/min，冲3-5分钟，然后更换流动相即可。
2、使用后用可用80%甲醇冲洗保存，如果长期不使用，建议用纯甲醇或乙腈保存。
原则上是根据流动相组分不要在柱子中产生难溶有机盐类。

追问

使用前不用冲纯甲醇？？

追答

用纯甲醇冲的话，可能会和柱子中的残留物生成难溶有机盐，而用80%的甲醇水溶液，这种风险会 降低。

长时间不用的柱子，使用前，可以用异丙醇活化一下。