游泳池水,废水和生活饮用水中大肠菌群检测有何异同
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游泳池水中大肠菌群检验方法:
一、大肠菌群多管发酵法测定
1定义
大肠菌群(coliform bacteria)系指一群在36±1℃培养24h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
2 仪器
见《公共场茶具的大肠菌群测定方法》。
3培养基和试剂
3.1乳糖蛋白胨培养液
3.1.1成分:蛋白胨 10g,牛肉膏 2g,乳糖 5g,氯化钠 5g,1.6%(V/V)溴甲酚紫乙醇溶液 1mL,蒸馏水 1000mL
三.倍浓缩乳糖蛋白胨培养液按上述乳糖蛋白胨培养液浓缩三倍配制。
3.1.2配法:将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠置于1000ml蒸馏水中加热溶解,调pH到]7.2~7.4。再加入1ml 1.6%溴甲酚指示剂,充分混匀,分装到含有倒管的试管中,115℃高压灭菌15min。
3.2伊红美兰琼脂
见《公共场所茶具的大肠菌群测定方法》。
3.3革兰氏染色液
风《公共场所茶具的大肠菌群测定方法》。
3.4染色法
见《公共场所茶具的大肠菌群测定方法》。
4推测性试验
4.1在2个装有50ml三倍浓缩乳糖胆盐培养液的大试管或烧杯内各加入水样100ml。
4.2在10支装有5ml三倍浓缩乳糖胆盐培养液的试管里各加入水样10ml。
4.3轻摇试管,使液体充分混匀,置36±1℃培养箱中,培养24h。
4.4观察每管是否产气,如不产气则报告为大肠菌群阴性;若有气体产生则为推测性试验阳性,需做进一步的证实试验。
5证实试验
5.1平板分离
自推测性检验阳性管中取一接种环培养液,接种到伊红美蓝琼脂平板上,置36±1℃培养箱培养18~24h,观察菌落形态,典型的大肠菌群菌落为黑紫色或红紫色,具有金属光泽。
5.2复发酵试验
挑取可疑大肠菌群菌落1或2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,于36±1℃培养箱中,培养24h。
5.3凡乳糖发酵管最终产酸产气,革兰氏染色为阴性的最大可能数(MPN)检索表得出1000ml水样中总大肠菌群的MPN值。
一、大肠菌群多管发酵法测定
1定义
大肠菌群(coliform bacteria)系指一群在36±1℃培养24h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
2 仪器
见《公共场茶具的大肠菌群测定方法》。
3培养基和试剂
3.1乳糖蛋白胨培养液
3.1.1成分:蛋白胨 10g,牛肉膏 2g,乳糖 5g,氯化钠 5g,1.6%(V/V)溴甲酚紫乙醇溶液 1mL,蒸馏水 1000mL
三.倍浓缩乳糖蛋白胨培养液按上述乳糖蛋白胨培养液浓缩三倍配制。
3.1.2配法:将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠置于1000ml蒸馏水中加热溶解,调pH到]7.2~7.4。再加入1ml 1.6%溴甲酚指示剂,充分混匀,分装到含有倒管的试管中,115℃高压灭菌15min。
3.2伊红美兰琼脂
见《公共场所茶具的大肠菌群测定方法》。
3.3革兰氏染色液
风《公共场所茶具的大肠菌群测定方法》。
3.4染色法
见《公共场所茶具的大肠菌群测定方法》。
4推测性试验
4.1在2个装有50ml三倍浓缩乳糖胆盐培养液的大试管或烧杯内各加入水样100ml。
4.2在10支装有5ml三倍浓缩乳糖胆盐培养液的试管里各加入水样10ml。
4.3轻摇试管,使液体充分混匀,置36±1℃培养箱中,培养24h。
4.4观察每管是否产气,如不产气则报告为大肠菌群阴性;若有气体产生则为推测性试验阳性,需做进一步的证实试验。
5证实试验
5.1平板分离
自推测性检验阳性管中取一接种环培养液,接种到伊红美蓝琼脂平板上,置36±1℃培养箱培养18~24h,观察菌落形态,典型的大肠菌群菌落为黑紫色或红紫色,具有金属光泽。
5.2复发酵试验
挑取可疑大肠菌群菌落1或2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,于36±1℃培养箱中,培养24h。
5.3凡乳糖发酵管最终产酸产气,革兰氏染色为阴性的最大可能数(MPN)检索表得出1000ml水样中总大肠菌群的MPN值。
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