Question

临床免疫检验常用的分析技术

Answer 1

　　一、免疫标记技术：2种分类

　　1.(1) 免疫组化技术(immunohistochemical technique): 用于组织切片或其他标本中抗原抗体的定位(2)免疫测定(immunoassay): 用于液体标本中抗原或抗体的测定.

　　2.(1) 免疫荧光技术 (2) 酶免疫技术 (3) 放射免疫技术(4) 金标技术(5)化学发光技术

　　酶免疫技术—固相酶免疫技术―酶联免疫吸附测定(ELISA)

　　ELISA方法类型与操作步骤

　　双抗体夹心法：检测抗原最常用的方法

　　原理(操作步骤)： (1) 特异性抗体包被载体形成固相抗体. (2) 洗去未结合的抗体和杂质. (3) 加入待测样品，使其中相应抗原和固相抗体呈特异性结合成复合物. (4) 再洗涤除去未结合的物质.(5) 加酶标抗体，使之与固相上的抗原呈特异性结合.(6) 经充分洗涤后除去未结合的游离酶标记抗体.(7) 加入相应酶的底物，固相化的酶催化底物变成有色产物，颜色反应的程

　　度与固相上抗原的量有关.

　　适用范围：检测抗原的最常用方法 ,用此方法检测的抗原，应至少有2个以上结合位点，故不能用以测定半抗原物质。

　　2、竞争法：(可用于测定抗原或抗体)

　　原理(操作步骤)：以测定抗原为例(1) 将特异性抗体包被载体，使形成固相抗体,(2) 洗去杂质，待测孔中同时加待测标本和酶标记抗原，使之与固相抗体反应。如待测标本中含有抗原，则与酶标记抗原共同竞争结合固相抗体。待测标本中抗原量越多，酶标记抗原结合量越少(3) 洗涤除去游离酶标记物后，加底物显色(4) 结果是不含受检抗原的对照孔，其结合的酶标记抗原最多，显色最深。对照孔与待测孔颜色深度之差代表受检标本中的抗原量。待测孔越淡, 标本中抗原量越多。

　　3、间接法：(可检测各种相应抗体)

　　原理(操作步骤)：(1) 将特异性抗原包被载体，使形成固相抗原; (2) 洗去未结合的物质,加入待测样品，使其中待测的特异性抗体与固相抗原相结合形成固相抗原抗原复合物;(4)再经洗涤后，固相上仅留下特异性抗体; (5) 加酶标抗人球蛋白(酶标抗抗体)，使与固相复合物中抗体结合，从而使待测抗体间接标记上酶;(6) 洗涤除去多余的酶标抗体，固相结合酶量就代表待测抗体的`量; (7) 最后加入底物显色，其颜色深浅可代表待测抗体量。

　　免疫荧光法---抗核抗体的检测

　　二、沉淀反应

　　可溶性抗原与相应抗体特异性结合所出现的反应。反应分为两个阶段:(1) 抗原抗体特异性结合;(2) 形成可见的免疫复合物。

　　三、凝集反应

　　细菌和红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集(agglutination)现象。

　　凝集反应的发生分为两个阶段：(1)抗原抗体的特异结合;(2)出现可见的颗粒凝聚。