Question

高效液相色谱仪的基本操作

Answer 1

色谱法是一种分离技术，试样混合物的分离过程也就是试样中各组分在称之为色谱分离柱中的两相间不断进行着的分配过程。 其中的一相固定不动，称为固定相； 另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体（气体或液体），称为流动相。 当流动相中携带的混合物流经固定相时，其与固定相发生相互作用。由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中流出。与适当的柱后检测方法结合，实现混合…

Answer 2

一、实验准备阶段

需要配置好实用所需的流动相，要注意所使用的流动相不能对实验或设备造成影响或损害（比如堵塞或腐蚀）。准备好流动相之后，需要对仪器及色谱柱进行冲洗和平衡，确保仪器压力正常，基线稳定。

样品填写需要经过必要的净化处理，过0.45um以下微孔滤膜确保样品是澄清溶液，并装入合适的液相色谱样品瓶待用

二、样品运行

根据实验需要的方法参数设置，在仪器的控制软件中设置或调用参数，包括流速，流动相组成， 进样量，柱温，检测波长等。之后根据样品信息编辑进样序列表，运行序列方法分析样品并得到数据

三、数据分析

色谱得到的原始数据为色谱图，我们需要对途中的色谱峰进行积分，获得峰面积，并根据实验需要，使用不同的方法进行定量计算，比如外标法，内标法，面积百分比法等。

仪器还可以得到光谱或者质谱信息，我们可以通过色谱柱数据软件的对应功能得到光谱图及质谱图，获得定性信息。

获得所需信息后，可以利用色谱软件将结果输出成不同格式的报告，或讲处理好的结果导入其他软件（如统计分析）进行二次处理。

Answer 3

1)过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。2)抽滤后的流动相超声脱气10-20分钟。3)打开HPLC工作站(包括计算机软件和色谱仪)，连接流动相管道和检测系统。4)进入HPLC控制界面的主菜单，点击手动进入手动菜单。