Question

血液dna提取为什么用edta抗凝血

Answer 1

1.1 样本来源 静脉抽取30份健康体检者血样.10份用EDTA抗凝, 10份不加抗凝处理,10份不抗凝在-40 ℃冻存2 a左右.
1.2 DNA提取方法 取凝血块,用9 g/L 氯化钠匀浆大约30 s,每换一个样本都要用70%乙醇和9 g/L 氯化钠清洗匀浆器以避免交叉污染.取匀浆后样本1 ml置于离心管中,室温8 000 r离心5 min后,去掉上层.血细胞在1 ml的Tris缓冲液I(10 mmol/L Tris?HCl,pH 8.0；10 mmol/L 氯化钾；10 mmol/L 氯化镁；2 mmol/L EDTA,pH 8.0；25 mL/L Triton X?100)中裂解10 min, 其间轻轻用力充分混匀, 室温10 000 r离心2 min,沉淀要用Tris 缓冲液I洗2次.将沉淀用220 μl的Tris 缓冲液II (10 mmol/L Tris?HCl,pH 8.0；10 mmol/L 氯化钾；10 mmol/L 氯化镁；2 mmol/L EDTA,pH 8.0；0.4 mol/L 氯化钠；10 g/L SDS)悬浮,轻轻振荡试管, 使底部细胞团块散开,在56 ℃保温15 min裂解.加入100 μl 5 M 氯化钠充分振荡沉淀去除蛋白质.10 000 r离心5 min,取上清.加2.5倍体积的无水乙醇沉淀DNA后,10 000 r离心5 min,弃上清.室温晾20 min左右待酒精挥发干净后以适量TE缓冲液(10 mmol/L Tris?HCl,pH 8.0,1 mmol/L EDTA)回溶.EDTA抗凝血中DNA的提取从去掉上层开始.