Question

植物提取的总RNA跑胶出现四个条带是怎么回事，多的一个条带是怎么来的？求解答

Answer 1

植物提取的总RNA跑胶出现四个条带，多出的一个条带可能是由以下原因导致的：
1.叶绿体RNA：植物叶片中除了常见的28S、18S和5S rRNA外，还存在叶绿体RNA。叶绿体RNA的分子量通常在18S和5S之间，因此在电泳图上会多出一个条带。
2.RNA降解：RNA部分降解也可能会导致出现多条带。如果RNA提取过程中操作不当，或者RNA在提取后没有妥善保存，可能会导致RNA降解，从而在电泳图上出现多条带。
3.基因组DNA污染：如果RNA提取过程中没有完全去除基因组DNA，可能会在电泳图上出现额外的条带。基因组DNA的条带通常比RNA条带更宽，位置也不同。可以通过DNase处理来去除基因组DNA污染。
4.实验操作问题：
上样量过大：如果上样量过大，可能会导致条带弥散或出现多条带。可以减少上样量，重新进行电泳。
电泳条件不当：电泳时间过长或电压过高也可能导致RNA降解或条带弥散。可以调整电泳时间和电压，确保RNA在适当的条件下运行。
样品处理问题：细胞裂解不充分：如果细胞裂解不充分，可能会导致RNA提取不完全，从而影响电泳结果。可以增加裂解时间或使用更有效的裂解方法。
RNA酶污染：RNA酶污染是导致RNA降解的常见原因。确保所有试剂和耗材都经过DEPC处理，操作过程中戴手套，避免RNA酶污染。
综上所述，植物提取的总RNA跑胶出现四个条带，多出的一个条带可能是叶绿体RNA、RNA降解、基因组DNA污染或实验操作不当导致的。
可以通过以下方法进一步确认和解决这个问题：
1.使用RNA Marker对照条带大小，确定多出的条带是否为叶绿体RNA。
2.重新提取RNA，确保操作过程中的RNA酶污染控制。
3.进行DNase处理，去除基因组DNA污染。
4.调整电泳条件，减少上样量，确保电泳结果的准确性。