Question

甲醛滴定法注意事项

Answer 1

甲醛滴定法测定氨基氮
一. 目的
初步掌握甲醛滴定法测定氨基氮含量的原理和操作要点。
二. 原理
氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下平衡：

－NH3是弱酸，完全解离时PH为11－12或更高，若用碱滴定－NH3所释放的H＋来测定氨基酸，一般指示剂变色域小于10，很难准确指示滴定终点。
常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物，使上述平衡右移，促使－NH3释放H＋，使溶液的酸度增加，滴定中和终点移至酚酞的变色域内（PH9.0左右）。因此可用酚酞作指示剂，用标准氢氧化钠溶液滴定。

如样品为一种已知的氨基酸，从甲醛滴定的结果可算出氨基氮的含量。如样品为多种氨基酸的混合物如蛋白质水解液，则滴定结果不能作为氨基酸的定量依据。但此法简便快速，常用来测定蛋白质的水解程度，随水解程度的增加滴定值也增加，滴定值不再增加时，表明水解作用已完全。
三. 仪器、试剂、材料
1. 仪器
25ml锥形瓶；3ml微量滴定管；吸管；研钵。
2. 试剂
(1) 300ml 0.05mol/L标准甘氨酸溶液
准确称取375mg 甘氨酸，溶解后定容至100ml。
(2) 500ml 0.02mol/L标准氢氧化钠溶液
(3) 20ml酚酞指示剂
0.5 ％酚酞的50 ％乙醇溶液
(4) 400 ml中性甲醛溶液
在50ml 36－37 ％分析纯甲醛溶液中加入1ml 0.5％酚酞乙醇水溶液，用0.02mol/L的氢氧化钠溶液滴定到微红，贮于密闭的玻璃瓶中。
四. 操作方法
1. 取3个25 ml的锥形瓶，编号。向1、2号瓶内各加入0.05mol/L标准甘氨酸溶液2ml和水5ml，混匀。向3号瓶内加入7 ml水。然后向三个瓶中各加入5滴酚酞指示剂，混匀后各加2 ml甲醛溶液再混匀，分别用0.02mol/L标准氢氧化钠溶液滴定至溶液显微红色。
重复以上实验两次，记录每次每瓶消耗的标准氢氧化钠溶液的毫升数。取平均值，计算甘氨酸氨基氮的回收率。
2. 取未知浓度的甘氨酸溶液2ml，依上述方法进行测定，平行做几份，取平均值。计算每毫升甘氨酸溶液中含有氨基氮的毫克数。
五. 结果处理
1. 回收率计算：

Answer 2

初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点

二、原理

水溶液中的氨基酸为兼性离子，因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基。甲醛可与氨基酸上的—N+H3结合，形成—NH—CH 2 OH、—N(CH 2 —OH) 2 等羟甲基衍生物，使N+H3上的H+游离出来，这样就可以用碱滴定N+H3放出H + ，测出氨基氮，从而计算氨基酸的含量。

若样品中只含有单一的已知氨基酸，则可由此法滴定的结果算出氨基酸的含量。

若样品中含有多种氨基酸（如蛋白质水解液），测不能由此法算出氨基酸的含量。

脯氨酸与甲醛作用后，生成的化合物不稳定，导致滴定后结果偏低；酪氨酸含酚基结构，导致滴定结果偏高。

三、材料、 试剂 与器具

（一） 试剂

1、0.5%酚酞酒精溶液

称0.5g酚酞溶于100ml60%酒精中。

2、0.05%溴麝香草酚蓝溶液

取0.05溴麝行草酚蓝溶于100ml 20%乙醇溶液中。

3、1%甘氨酸溶液

取1g甘氨酸溶于100ml 蒸馏 水。

4、标准0.100mol/L 氢氧化钠溶液

5、中性甲本醛溶液

取甲醛溶液50ml，加0.5%酚酞指示剂约3ml，滴加0.1mol/LnaOH溶液，使溶液呈微粉红色，临用前中和。

（二）实验器具

1、锥形瓶 2、碱式滴定管

3、 移液管洗耳球 4、天平

5、容量瓶 6、试剂瓶

7、量筒 8、玻棒与烧杯

四、操作步骤

1、取3只100ml锥形瓶，按下表加入试剂。

2、混匀后用标准0.100mol/L氢氧化钠溶液滴定至紫色（pH8.7~9.0）

3、结果计算

每毫升 氨基酸 溶液中含氨基氮的毫克数为

五、注意事项

利用甲醛滴淀法可以用来测定蛋白质的水解程度。随着蛋白质水解度的增加，滴定值也增加，当蛋白质水解完成后，滴定值不再增加。


Answer 3

甲醛滴定，生物术语，是测定氨基氮含量的一种方法。 常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物，使上述平衡右移，促使－NH3释放H+，使溶液的酸度增加，滴定中和终点移至酚酞的变色域内（PH9.0左右）。因此可用酚酞作指示剂，用标准氢氧化钠溶液滴定。注意事项
1. 标准氢氧化钠溶液应在使用前标定，并在密闭瓶中保存。不可使用隔日贮在微量滴定管中的剩余氢氧化钠。
2. 中性甲醛溶液在临用前配制，若已放置一段时间，则使用前需要重新中和。
3. 本实验为定量实验，甘氨酸和氢氧化钠的浓度要严格标定，加量要准确，全部操作要按分析化学要求进行。
4.脯氨酸与甲醛作用生成不稳定的化合物，使滴定毫升数偏低。而酪氨酸的滴定毫升数结果偏高。