分离和提纯蛋白质的方法
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1. 前处理
把蛋白质从原来的组织或溶解状态释放出来,保持原来的天然状态,并不丢
失生物活性.常用的方法：匀浆器破碎、超生波破碎、纤维素酶处理以及溶菌酶等.
超声波破碎法：当声波达到一定频率时,使液体产生空穴效应使细胞破碎的技术.超声波引起的快速振动使液体局部产生低气压,这个低气压使液体转化为气体
,即形成很多小气泡.由于局部压力的转换,压力重新升高,气泡崩溃.崩溃的气泡产生一个振动波并传送到液体中,形成剪切力使细胞破碎.
2． 粗分级
分离可用盐析、等电点沉淀和有机溶剂分级分离等方法.这些方法的特点是简便、处理量大,
3． 细分级
样品的进一步纯化.样品经粗分离以后,一般体积较小,杂蛋白大部分已被除去.进一步纯化,一般使用层析法包括凝胶过滤、离子交换层析、吸附层析以及亲和层析等.必要时还可选择电泳、等电聚焦等作为最后的纯化步骤.
结晶是最后的一步
把蛋白质从原来的组织或溶解状态释放出来,保持原来的天然状态,并不丢
失生物活性.常用的方法：匀浆器破碎、超生波破碎、纤维素酶处理以及溶菌酶等.
超声波破碎法：当声波达到一定频率时,使液体产生空穴效应使细胞破碎的技术.超声波引起的快速振动使液体局部产生低气压,这个低气压使液体转化为气体
,即形成很多小气泡.由于局部压力的转换,压力重新升高,气泡崩溃.崩溃的气泡产生一个振动波并传送到液体中,形成剪切力使细胞破碎.
2． 粗分级
分离可用盐析、等电点沉淀和有机溶剂分级分离等方法.这些方法的特点是简便、处理量大,
3． 细分级
样品的进一步纯化.样品经粗分离以后,一般体积较小,杂蛋白大部分已被除去.进一步纯化,一般使用层析法包括凝胶过滤、离子交换层析、吸附层析以及亲和层析等.必要时还可选择电泳、等电聚焦等作为最后的纯化步骤.
结晶是最后的一步
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11
2024-08-28 广告
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