Question

列举蛋白质的分离纯化方法，并分别阐明其原理。

Answer 1

【答案】：蛋白质分离纯化的主要方法：
①盐析
根据性质：蛋白质的沉淀。
作用机制：中性盐中和表面电荷，破坏水化层。
影响因素：表面电荷、水化层、溶剂性质。
②电泳
根据性质：蛋白质的两性解离。
作用机制：异性电荷互相吸引，带点粒子在电场中泳动。
影响因素：电荷种类及数量、分子大小及形状、溶液离子强度及pH等。
③离子交换层析
根据性质：蛋白质的两性解离。
作用机制：阳离子交换剂在pH7.0时，带有稳定的负电荷，可与蛋白质的阳离子结合。阴离子交换剂在pH7.0时，带有稳定的正电荷，可与蛋白质的阴离子结合。当被分离的蛋白质溶液流经离子交换剂柱时，带有相反电荷的蛋白质可因离子交换而吸附于柱上，随后又可被带同样性质电荷的离子所置换而被洗脱。影响因素：电荷、分子量、分子形状。
④分子筛(凝胶过滤层析)
根据性质：蛋白质的高分子性质。
作用机制：凝胶过滤树脂颗粒呈多孔状结构，在层析过程中，蛋白质小分子能进入树脂颗粒的孔，因而路径长，后洗脱出来；较大的蛋白质分子不能进入孔，路径短，先洗脱出来。
影响因素：分子大小及形状。
⑤离心
根据性质：蛋白质的高分子性质。
作用机制：在离心场中，质量或密度不同的分子以不同的速度
沉降到试管底部。
影响因素：分子大小及形状、溶液特性。