Question

关于实验中的酶切反应

小弟我最近在做酶切，做的是HindIII和EcoRI的双酶切，两个酶的缓冲液不同，所以准备两次酶切，想请教各位前辈在做完一个酶切到开始第二个酶切之间有什么要注意的吗或者说是具体还要做什么吗？

Answer 1

你酶切完后要注意第一次酶切后胶回收的回收率要高，而且这样分两步做很麻烦，你不如用HindIII和EcoRI均具有较高活性的buffer，那样又快质量又高。

Answer 2

不需要进行两次酶切。直接进行双酶切，缓冲液用NEB Buffer2。