Question

质粒酶切的纯化方式会影响连接吗

Answer 1

需要，被切掉的部分同样带有粘性末端（因为粘性末端的碱基互补），会干扰目的片段与载体连接。
如果不想用胶回收方法纯化，可以选择吸附柱过滤除掉被切掉的小分子片段。
胶回收纯化的好处是直观的判断酶切实验结果是否理想，是否酶切完全，胶回收可以避免收集不完全酶切的质粒片段（包括完整的环状质粒和线性质粒）等等。质粒，目的基因酶切后，酶切液琼脂糖凝胶电泳，将含目的条带的凝胶切下来，进行胶回收，然后再在连接酶的作用下，4度和16度都可以（看你的目的基因的情况决定），将目的基因与目标质粒连接在一起。