Question

目前用于测序的技术主要有哪些？

Answer 1

DNA的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础。目前用于测序的技术主要有Sanger等（1977）发明的双脱氧链末端终止法与Gilbert（1977）发明的化学降解法。这两种方法在原理上差异很大，但都是根据核苷酸在某一固定的点开始，随机在某一个特定的碱基处终止，产生A，T，C，G四组不同长度的一系列核苷酸，然后在尿素变性的PAGE胶上电泳进行检测，从而获得DNA序列。目前Sanger测序法得到了广泛的应用。

Answer 2

目前常用的测序技术有一代Sanger测序，二代常规的illumina测序，擎科生物推出的快速二代测序技术Fast NGS。三代的Pacbio和Nanopore测序。
一代测序技术应用
1. PCR产物测序
对目的基因的PCR产物进行测序，获取目的基因序列；
2. 重测序
如克隆产物验证、SNPs、突变、插入、缺失等；
3. 分型分析菌分类学鉴定、HLA分型、病毒分型等；
4.临床应用
肿瘤突变基因的检测和肿瘤个体化治疗，致病基因位点明确并且数量有限的单基因遗传病检测；
5.对新一代测序技术的结果进行验证。

常规二代测序技术应用
1.基因组de novo测序、转录组测序、重测序、扩增子测序、宏基因组测序、染色质免疫共沉淀测序、DNA甲基化测序等。
2.在医学上的应用主要包括癌症基因组、遗传病基因组、肿瘤与代谢疾病等。

Fast NGS应用：
1.抗体可变区测序；
2.TA克隆测序；
3.菌种鉴定；
4.质粒、病毒、线粒体、叶绿体等小基因组测序；
5.基因编辑上可用于sgRNA文库测序、靶基因鉴定、个体基因型检测、基因编辑效率检测。
比常规二代测序更快速，更优惠，对样本要求更低。

三代测序技术的应用：
1.基因组组装；
2.全长转录组测序；
3.甲基化测序等。