请教5,试述显示细胞内DNA和碱性磷酸酶的原理和方法
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2017-03-14 · 试剂订购热线:400-968-6088
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(1)细胞内特异显示DNA的方法是福尔根反应:首先用酸水解去除RNA,仅保留DNA,同时除去DNA上嘌呤脱氧核糖核苷酸的嘌呤,使脱氧核糖的醛基暴露,所暴露的自由醛基与希夫试剂反应呈紫色,从而显示细胞内DNA所在部分。
(2)特异检测碱性磷酸酶的方法是格莫瑞方法:
①样品制备时首先要保存酶的活性;采用冷冻切片,以冷丙酮,甲醛进行短期固定;
②将样品与甘油磷酸酯(底物)共同温育,恢复酶2+的活性;
③酸水解作用释放的磷酸根与Ca结合生成不溶性的磷酸钙;
④进一步转变成金属银或硫化铅等有颜色的化合物;
⑤金属沉淀或显色的部分,即碱性磷酸酶存在的活性部分
(2)特异检测碱性磷酸酶的方法是格莫瑞方法:
①样品制备时首先要保存酶的活性;采用冷冻切片,以冷丙酮,甲醛进行短期固定;
②将样品与甘油磷酸酯(底物)共同温育,恢复酶2+的活性;
③酸水解作用释放的磷酸根与Ca结合生成不溶性的磷酸钙;
④进一步转变成金属银或硫化铅等有颜色的化合物;
⑤金属沉淀或显色的部分,即碱性磷酸酶存在的活性部分
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