Question

nk细胞的培养方法，

Answer 1

一、\x09复苏
1.\x09把冻存管从液氮中取出来,立即投入37℃水浴锅中,轻微摇动.液体都融化后（大概1-1.5分钟）,拿出来喷点酒精放到超净工作台里.
2.\x09把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中（用培养基把冻存管洗一遍,把粘在壁上的细胞都洗下来）,1000转离心5分钟.
3.\x09把上清液倒掉,加1ml培养基把细胞悬浮起来.吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动,使培养皿中的细胞均匀分布.
4.\x09标好细胞种类和日期、培养人名字等,放到CO2培养箱中培养,细胞贴壁后换培养基.
5.\x093天换一次培养基.
二、\x09传代
1.\x09培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代.
2.\x09把原有培养基吸掉.
3.\x09加适当的胰蛋白酶（能覆盖细胞就行）,消化1-2分钟.
4.\x09细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化.
5.\x09用移液枪吹打细胞,把细胞都悬浮起来.
6.\x09把细胞吸到15ml的离心管中,1000转离心5分钟.
7.\x09倒掉上清液,加1-2ml培养基,把细胞都吹起来.
8.\x09根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中.一般,癌细胞分5个,正常细胞传3个.继续培养.
三、\x09 冻存
把细胞消化下来并离心（同上）.用配好的冻存液把细胞悬浮起来,分装到灭菌的冻存管中,静止几分钟,写明细胞种类,冻存日期.4℃ 30min,-20℃ 30min,-80℃过夜,然后放到液氮灌中保存.
冻存液的配制：70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加,边滴边摇.
要注意的就是无菌操作!