病毒如何灭活
病毒灭活试验的适用范围
主要适用于消毒产品鉴定或日常监测。用具有一定代表性的、活的病毒及其细胞感染技术，评价各种用途的消毒因子对测试病毒的杀灭效果。按此方法进行的试验，只是对消毒因子的灭活病毒能力的重要方面进行验证。
病毒灭活试验需要在专业的实验室进行，不同实验室级别可开展不同的病毒试验，参考如下：
P2级实验室：单纯疱疹病毒(ATCCVR-1493)、带状疱疹病毒(ATCCVR-1433) 、冠状病毒229E(ATCCVR-740)、流感病毒H1N1 ( ATCCVR-1469)、流感病毒H3N2 (ATCCVR-544) 、腺病毒5型(ATCCVR-5)、肠道病毒EV71 (ATCCVR-1432) 、柯萨奇病毒A18 (ATCCVR-176) 、轮状病毒(ATCCVR-2018)
P3级实验室：新型冠状病毒（2019-nCoV）、禽流感、SARS
P4级实验室：埃博拉病毒、非洲猪瘟病毒
病毒灭活试验哪里做的专业呢？
中科检测
具有生物安全等级P2级实验室及联合P3/P4级实验室，提供针对消毒器械、消毒剂、抗病毒材料及其它产品的病毒杀灭试验或病毒灭活验证等第三方检测服务。
病毒灭活试验的试验器材
(1)试验用病毒株：脊髓灰质炎病毒1型(poliovirus-Ⅰ ,PV-Ⅰ)疫苗株；艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)美国株。
(2)宿主细胞：可采用VERO细胞系、BGM细胞、Hela细胞系或FL细胞系，作为PV-1的测试细胞。用含有人T淋巴细胞白血病病毒Ⅰ型( human T cell leukemiavirus 1，HTLV-1)基因的人淋巴细胞(MT4株)作为HIV-1的测试细胞。
(3)细胞培养瓶与96孔培养板。(4)恒温水浴箱。
(5)二氧化碳培养箱。
(6)层流超净工作台。
(7)低温冰箱(-20℃，-80℃)。
(8)液蚕罐。
(9)倒置显微镜。
(10)离心机。
(11)可调移液器及配套一次性塑料吸头。
(12)细胞维持培养基。
(13)细胞完全培养基。
(14)去离子水。
病毒灭活试验的病毒悬液制备
(1)从液氮中取出冻存的试验用宿主细胞，在37℃温水中迅速融化，用毛细吸管移植于含有细胞维持液的细胞管内，吹吸数次，使混匀，立即离心(3000r/min，3min)，去上清液。再加入适当的细胞维持液，吹吸数次，使混匀，同上离心后，转种于加有10ml完全培养基的培养瓶中。逐日观察细胞生长情况，在细胞长满单层时，用于消毒试验。
(2）取出低温冻存的试验病毒毒种，37℃水浴融化，用细胞维持液作10倍稀释，然后接种于已经长满单层细胞的细胞瓶内，置37℃温箱中，使与细胞吸附、生长。逐日观察病变，待3/4细胞出现病变时，收获病毒。
(3）将含有病毒及宿主细胞的培养液，在冰浴条件下，用超声波（或反复冻融）破碎宿主细胞，释放病毒。然后，尽快离心(6000r/min，15min）去除沉淀（主要为细胞碎片)，上清液即为所需的病毒悬液。按每管1.Oml分装于无菌离心管(1.5ml)中-
(4)取1支病毒悬液，按病毒滴度测定法，测定其病毒滴度。其余均冷冻保存于-80℃备用。
病毒灭活试验的滴度计算方法
(1)终点稀释法病毒感染滴度的计算
以半数细胞感染剂量(TCID50)表示。TCID50的对数值计算公式如下。
TCID50对数值=病变率高于50%组稀释度的对数值＋距离比例
(2)噬斑法病毒感染滴度的计算
噬斑法病毒感染滴度，以噬斑形成单位数（ pfu)，简称噬斑数表示。计数方法同活菌培养计数技术。
每毫升测试样品中的病毒含量计算（pfu/ml）=平板平均噬斑数×稀释倍数
(3)平均灭活对数值的计算
平均灭活对数值按下式计算：设阳性（病毒）对照组平均病毒感染滴度（TCID50或pfu）的为No，试验（消毒)组平均病毒感染滴度（TCI,50或pfu）为Nx。
平均灭活对数值= log No—log Nx
