Question

关于酵母质粒转化大肠杆菌

Answer 1

大肠杆菌属于细菌，酵母菌为单细胞真菌，细菌的基本结构包括：细胞壁、细胞膜、细胞质、遗传物质；真菌的基本结构包括：细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核等．故真菌和细菌在细胞结构上的明显区别是有无成形的细胞核．
酿酒酵母的电转感受态制备方法和电转化方法
(1)接种工业酒精酵母至30 mL液体YEPD培养基，30度培养12 h；
(2)取培养物以1%的接种量转接到30 mL新鲜YEPD液体培养基中，30度培养8 h，
使菌体达到同步生长状态；
(3)将酵母培养物置于冰上放置30 min后，6,000 r/min离心5 min收集菌体；
(4)弃上清，加入已预冷的15 mL超纯水洗涤菌体一次；
(5)6,000 r/min离心5 min收集菌体，用15 mL 1 mol/L山梨醇重复洗涤菌体三次；
(6)离心收集菌体，加入200μL 1 mol/L山梨醇重悬浮菌体，取200μL的菌悬液至1.5 mL
离心管中；
(7)在制得的菌悬液中加入20μL(≤5μg)待转化的质粒或DNA片段，轻轻混匀后冰浴
10 min；
(8)将冰浴后的菌悬液转入已预冷的电转杯中，1,500 V电击5 ms；
(9)加入适量体积的1 mol/L山梨醇将电转后的菌悬液从电转杯中洗出，取200μL涂布
相应的抗性平板；
(10)30度培养3-5天挑选转化子。