Question

谁能帮我翻译一下下面这段文章？

The first step in subcloning is to grow up enough material. This means either growing up a sufficient number of E. coli cells carrying the plasmid or the artificial chromosome, or infecting an E. coli culture with a phage clone. The purified recombinant vector DNA is then digested with the appropriate restriction enzyme.In some older vectors, where the insertion site is a single restriction enzyme recognition site, the insert will be flanked by sites recognized by that enzyme. The choice is then obvious. However, most commonly used vectors now have multiple cloning sites, allowing you a lot more flexibility. In particular, if it is important to be able to excise the insert in one piece, then you will need to be able to use an enzyme that does not cut the insert itself. For this purpose, you would be likely to choose an enzyme that cuts DNA infrequently such as NotI, which you can predict is unlikely to have a recognition site within the insert.On the other hand, if you want to subclone a smaller piece of the insert, you might choose a medium-frequency cutter such as EcoRI. After digestion, you would probably separate half of the reaction mixture by agarose gel electrophoresis (Figure 8.7). This can then be blotted (see the description of Southern blotting below) and probed with the same probe you used to screen the library.
With the correct DNA fragment thus identified, you can run out another gel just like the other one, cut out the DNA fragment, purify it from the agarose, and ligate it to your plasmid vector.
Artificial chromosome vectors (BAC, PAC) have inserts measuring hundreds of kilobasepairs, making it impractical to digest and separate them. An alternative approach for these is shotgun subcloning. This method is based on random physical shearing of the recombinant vector. The resulting fragments are cloned into plasmids, transformed into bacteria, and plated.A replica membrane is then lifted from this plate, and probed with the same probe. In this way, subclones containing the desired sequence can be identified.

Answer 1

亚克隆的第一步是要获得足够的原料。这意味着要么通过培养携带有质粒或人工合成的染色体的大肠埃希菌（E. coli）细胞，要么用质粒转染E. coli。然后用合适的限制性酶消化纯化的重组DNA载体。在过去的载体构建中，插入位点仅是一个单独的限制酶识别的位点，这样能够保证插入的准确性。选择就是显而易见的。但是如今大多数常用的载体具有多个克隆位点，就使你的选择有更多灵活性。特别是在某些重要的试验，要对插入的一个单独片段做检测分析时，那么你就应该使用一种不会对插入的片段进行剪切的酶。为此，你可能会选择那种只能部分切割DNA的酶，比如NotI，它不太可能会识别插入部分内的所有位点。另一方面，如果你想亚克隆一小段插入片段，你可以选择一种中等剪切频率的酶，比如EcoRI。消化之后，分离出一半的琼脂糖反应混合物凝胶电泳（图8.7）。这样可以用斑点法（见下面Southern blotting的描述）和用曾经从图书馆资料中获得的探针来检测。
得到了确认的DNA序列，再使用另一部分的凝胶，切断DNA序列，通过琼脂糖纯化之后连接到质粒载体上。人工染色体载体（BAC，PAC）的插入子达到几百个碱基对，而使它接下来的消化和分离变的不容易操作。对此打靶亚克隆技术是一种有效的措施。该方法是以随机剪切获得的重组载体为基础。结果所有的克隆片段结合到相应的质粒上，通过转染细菌，在其内复制组装。从组装体中提取出复制体，再用同样的探针筛检。用此方法可以对克隆产物中所希望得到的序列进行鉴定。

希望能有所帮助！

Answer 2

在subcloning的第一步将长大足够的材料。 这意味着长大大肠埃希氏菌细胞的一个充足的数字运载质粒或人为染色体或者传染与噬菌的克隆的大肠埃希氏菌文化。 被净化的再组合传染媒介脱氧核糖核酸然后消化与适当的制约酵素。在一些更旧的传染媒介，插入站点是一个唯一制约酵素识别位点，插入物将由那酵素认可的站点侧。 选择是然后显然的。 然而，多数常用的传染媒介现在有多个克隆站点，更大量给您灵活性。 特别是，如果能切除在一件的插入物是重要的，然后您将需要能使用不切开插入物的酵素。 为此，您可能选择罕见地切开脱氧核糖核酸例如NotI，您能预言是不太可能有在插入物之内的一个识别位点的酵素。在另一只手上，如果您想要对subclone每插入物的更小的片断，您也许选择一把中频的切削刀例如EcoRI。 在消化以后，您由琼脂糖胶凝体电泳法(图8.7)大概会分离反应混合物的一半。 这可能然后被弄脏(参见南部下面弄脏的描述)和探查与您曾经筛选图书馆的同一根探针。
With因而辨认的正确脱氧核糖核酸片段，您能耗尽另一个胶凝体象另一个，删去脱氧核糖核酸片段，净化它从琼脂糖，并且绑扎它对您的质粒传染媒介。
Artificial染色体传染媒介(BAC， PAC)有插入物测量数百kilobasepairs，使它不切实际消化和分离他们。 这些的一个可选择方法是subcloning的猎枪。 这个方法根据任意物理剪再组合传染媒介。 发生的片段被克隆入质粒，被变换成细菌，并且被镀。复制品膜从这块板材然后被举，并且探查与同样探查。 这样，包含期望序列的subclones可以被辨认。

Answer 3

第一步在subcloning将长大足够的材料。 这意味着长大E.的一个充足的数字二者之一。 运载质粒或人为染色体或者传染E.的杆菌细胞。 杆菌文化与噬菌的克隆。 被净化的再组合传染媒介脱氧核糖核酸然后消化与适当的制约酵素。在一些更旧的传染媒介，插入站点是一个唯一制约酵素识别位点，插入物将由那酵素认可的站点侧。 选择是然后显然的。 然而，通常半新传染媒介现在有多个克隆站点，更大量给您灵活性。 特别是，如果能切除插入物在一件是重要的，然后您将需要能使用不切开插入物的酵素。
为此，您可能选择少有地切开脱氧核糖核酸例如NotI，您在插入物之内能预言是不太可能有一个识别位点的酵素。另一方面，如果您想要subclone每插入物的更小的片断，您也许选择一把中频的切削刀例如EcoRI。 在消化以后，您由琼脂糖胶凝体电泳法(图8.7)大概会分离反应混合物的一半。 这可能然后被弄脏(参见南部下面弄脏的描述)和探查与您曾经筛选图书馆的同一根探针。
当正确脱氧核糖核酸片段因而被辨认，您能耗尽另一个胶凝体象另一个，删去脱氧核糖核酸片段，净化它从琼脂糖，并且绑扎它到您的质粒传染媒介。
人为染色体传染媒介(BAC， PAC)有插入物测量数百kilobasepairs，使它不切实际消化和分离他们。 一个可选择方法为这些是猎枪subcloning。 这个方法根据任意物理剪再组合传染媒介。 发生的片段被克隆入质粒，被变换成细菌，并且被镀。复制品膜从这块板材然后被举，并且探查与同样探查。 这样，包含期望序列的subclones可以被辨认。

有些单词翻不出来，不多，剩下的你自己看看吧！（看在我第一个帮你翻译的面子上把最佳答案给我吧……求你了）

Answer 4

第一步是在亚克隆长大足够的材料。这意味着要么长大有足够数量的大肠杆菌细胞中质粒或人工染色体，或感染大肠杆菌的文化噬菌体克隆。纯化的重组质粒DNA的消化，然后以适当的限制，一些旧enzyme.In载体，在那里插入网站是一个单一的限制性内切酶识别网站，插入将两侧的网站上所公认的酶。选择是那么明显。然而，最常用的载体现在多克隆位点，让您更多的灵活性。特别是，如果它是重要的是能够消费的插入一块，那么您将需要能够使用一种酶，不降低插入本身。为此，你可能会选择一种酶的DNA很少裁员，如NotI ，你可以预测是不可能有一个识别网站内insert.On另一方面，如果你想亚克隆较小的一块插入，您可以选择一个中等频率刀具，如限制性。经过消化，您可能会单独一半的反应混合物琼脂糖凝胶电泳（图8.7 ） 。这可以被遮盖（见说明Southern杂交以下） ，探索与你相同的探针用于屏幕图书馆。
用正确的DNA片段，从而确定了，您可以运行另外凝胶只是像其他人，减少了DNA片段，净化从琼脂糖，并结扎到您的质粒载体。
人工染色体载体（生物，爱国者）已插入测量数百kilobasepairs ，使不切实际的消化和它们分开。另一种办法是对这些猎枪亚克隆。这种方法是基于随机物理剪切的重组载体。由此产生的片段克隆到质粒转化细菌和plated.A副本膜，然后取消从这个板块，并探讨同探针。通过这种方式，亚克隆含有理想的序列可确定。