Question

回答下列有关遗传信息传递和表达的问题．图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序

回答下列有关遗传信息传递和表达的问题．图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列．现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG．请回答下列问题：（1）图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由______连接．（2）若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，其产物长度为______（3）若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d．从隐性纯合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有______种不同DNA片段．为了提高实验成功率，需要通过______技术扩增目的基因，以获得目的基因的大量拷贝，该方法也是检测______多样性最简单的方法．（4）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是______．在导入重组质粒后，为了筛选出含质粒的大肠杆菌，一般需要用添加______的培养基进行培养，用影印法接种到只含______的培养基中培养，可进一步筛选出含重组质粒的受体细胞．（5）假设用BamHⅠ切割DNA获取目的基因，用MboⅠ切割质粒，然后形成重组质粒，若将插入在抗生素B抗性基因处的目的基因重新切割下来，能否用BamHⅠ？______．为什么？______．

Answer 1

（1）DNA单链中相邻两个碱基之间通过“脱氧核糖-磷酸-脱氧核糖”连接．
（2）SmaⅠ识别的序列为GGGCCC，切割会产生平末端；图1中DNA片段含有两个SmaⅠ识别位点，第一个识别位点在左端534 bp序列向右三个碱基对的位置；第二个识别位点在右端658bp序列向左三个碱基的位置，从而两个位点切割后产生的DNA片段的长度分布为534+3，796-3-3，658+3，即得到的DNA片段长度为537、790、661．
（3）基因D的序列中含有两个识别位点，经过SmaI完全切割会产生537bp、790bp和661bp三种不同长度的片段，基因d的序列中含有一个识别位点，经过切割后会产生1327bp和661bp两种长度的片段．为了提高实验成功率，需要通过PCR技术扩增目的基因，是检测遗传多样性最简单的方法．
（4）能够获取目的基因并切开质粒的限制酶有识别序列为GGATCC的BamHI和识别序列为GATC的MboI，若使用MboI会同时破坏质粒中的抗生素A抗性基因和抗生素B抗性基因，所以要用BamH I来切割目的基因和质粒，切割后保留了完整的抗生素B抗性基因，便于筛选出含有重组质粒和质粒的大肠杆菌；再用用影印法接种到只含抗生素A的培养基中培养，重组质粒的受体细胞死亡，可进一步筛选出含重组质粒的受体细胞．
（5）用BamHⅠ切割DNA获取目的基因，用MboⅠ切割质粒，然后形成重组质粒，用BamHⅠ不一定将插入在抗生素B抗性基因处的目的基因重新切割下来，因为目的基因和抗生素B抗性基因拼接处含有GATC，不一定出现GGATCC．
故答案为：
（1）脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖
（2）537bp、790bp、661bp 
（3）2       PCR      遗传
（4）BamH I         抗生素B       　抗生素A
（5）不一定，因为目的基因和抗生素B抗性基因拼接处不一定出现GGATCC