Question

细菌基因组dna提取时常遇到哪些问题怎样解决

Answer 1

二、设备
　　移液管, 高速冷冻离心机, 台式离心机，水浴锅。
　　三、试剂
　　1、CTAB/NaCl溶液：4.1g NaCl溶解于80ml H2 O,缓慢加入10g CTAB,加水至100ml。
　　2、其它试剂：氯仿:异戊醇(24:1)，酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)，异丙醇，70% 乙醇，TE，10% SDS，蛋白酶 K (20mg/ml或粉剂)，5mol/L NaCl。
　　四、操作步骤：
　　1. 100ml 细菌过夜培养液, 5000rpm离心10分钟, 去上清液。
　　2. 加9.5ml TE悬浮沉淀, 并加0.5ml 10% SDS, 50μl 20mg/ml(或1mg干粉)蛋白酶 K, 混匀, 37℃保温1小时。
　　3. 加1.5ml 5mol/L NaCl, 混匀。
　　4. 加1.5ml CTAB/NaCl溶液, 混匀, 65℃保温20分钟。
　　5. 用等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提, 5000rpm离心10分钟, 将上清液移至干净离心管。
　　6. 用等体积氯仿:异戊醇(24:1)抽提, 取上清液移至干净管中。
　　7. 加1倍体积异丙醇, 颠倒混合, 室温下静止10分钟，沉淀DNA。
　　8. 用玻棒捞出DNA沉淀, 70%乙醇漂洗后, 吸干,溶解于1ml TE, -20℃保存。如DNA沉淀无法捞出,可5000rpm离心, 使DNA沉淀。
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