基因工程的操作过程的主要步骤包括哪些

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基因工程的操作过程的主要步骤:

切、接、转、增、筛(检)

  1. 切:获得DNA片段,取得目的基因;载体的选择制备。

    方法:从生物基因组中分离得到——基因组DNA——>酶切产物

    从总RNA重分离得到mRNA,再逆转录得到cDNA

    人工合成——化学合成;PCR(聚合酶链式反应

  2. 接:DNA片段和载体DNA在体外链接,形成重组子。

  3. 转:将重组的DNA进入宿主细胞。

    方法:转化——某一基因型细胞从周围介入中吸收另一基因型细胞的DNA,而使其基因型和表型发生相应变化的形象;转染——出去蛋白质外壳的病毒核酸感染细胞或原生质体的过程;转导——用噬菌体做载体,将一个细胞的基因传递给另一个细胞的过程。还有显微注射等。

  4. 增:培养已转化细胞,使目的基因在其中进行复制,扩增,并将其整合到手提细胞的基因组中。

  5. 筛、检:重组子的筛选与鉴定。筛选和鉴定转化细胞,获得外援基因高效表达的基因工程菌或细胞。

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