Question

pproex-1和pet-30b载体的区别

Answer 1

　　PET系列是IPTG诱导表达的，一般构建了PET表达载体导入表达宿主菌（BL21等），用LB培养基在37度液体培养到OD600值0.7左右的时候，加入终浓度为0.1-1.0mM的IPTG（浓度对诱导表达影响不是很大，对于PET系统，对IPTG浓度要求稍高，建议直接采用1mM），然后再37度培养4小时左右，接着就可以收集菌体进行SDS-PAGE检测了。
　　需要注意的是，大肠杆菌表达系统表达真核生物的蛋白时绝大部分情况是会以包涵体形式表达的，即使是可溶性表达非常好的pET系统也不能避免。
　　所以如果表达的蛋白需要有活性，建议加入IPTG后，降低温度进行诱导（25-30），这样可以增加可溶性表达的蛋白的比例。
　　另外如果只是用在制备抗体，那么则可以不用管是否是包涵体表达。