Question

分光光度法测量时最佳的吸光度范围是多少,如何是使由于读数而产生的测量误差？

Answer 1

分光光度计采用可产生多个波长的光源，通过分光装置，从而产生特定波长光源，透过测试的样品后，部分光线被吸收，计算样品吸光值，从而转化成样品浓度。样品吸光值浓度成正比。单色光辐射穿过被测物质溶液时，被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度成正比。那么分光光度计的最佳读取范围是多少呢？
分光光度计常用的算法如下式：A=-lg(I/I0)=-lgT=kLc，式中A为吸光度；I0为入射的单色光强度；I为透射的单色光强度；T为物质的透射率；L为被分析物质的光程；c为物质的浓度；k为摩尔吸收系数。对于较先进的紫外可见分光光度计，T测量的绝对误差主要受检测器的散粒效应影响，光电检测器噪声近似信号强度的平方根，即△T=KT1/2。
当T=0.135时，测量的相对误差最小。先进仪器自身△T也较小，一般吸光度在0.1-2.0之间，就能保证测量精密度在0.5%之内。若读数超出上述的范围，那么读取的相对误差会迅速的增大。与传统的普及型和中等性能的分光光度计，T测量的读数误差主要受热噪声或电子噪声影响，不随T本身而变化，约在0.002-0.01的范围。解得T=0.368，所以说，当T=0.368时，测量的相对误差是最小的，也就是说分光光度计在这个时候的读取结果是最准的。
又因为吸光度在分光光度计上的表盘读数是按照对数尺度刻分的。那么经过一些列的相关实验已经证实，当吸光度在0.2-0.8的范围内的时候，读取的读数的误差是最小的。我们在进行实验的时候，可以调整标样和待测样的浓度使其吸收正好落在这一范围内。所以，分光光度计最佳读取范围是吸光度在0.2-0.8的时候。