Question

分子生物，简答题，求助啊

Answer 1

5.1 模板链：5‘-ACTTAACAGTGGCTCATCG-3’，编码链： 5’-CGATGAGCCACTGTTAAGT-3’
5.2 EcoR I 5‘-GAATTC-3’; BamHI 5’-GGATCC-3’; HidIII 5’-AAGCTT-3’; Pst I 5’-CTGCAG-3’ ; Xma I 5’-CCCGGG-3’。II 型限制性内切酶的酶切位点特点是回文序列。
5.3
为避免假阳性，pcr所使用的模板不能有污染，Taq 酶退火温度一般控制在55°以上，引物设计正确合理，pcr体系合理无污染等。可以做不加模板（以等体积水补齐体系）的对照。
为避免假阴性，确保pcr体系正确合理，DNA聚合酶、dNTPs等试剂没有失活，buffer使用正确，模板没有污染降解，引物设计正确（GC含量合理，不形成茎环结构，不存在回文序列，长度合理，15~30bp之间）等。可以做加入标准基因的对照。
5.4
基因组DNA较长，在提取过程容易发生机械断裂，操作时尽量在温和条件下进行，加碱裂解液后不宜剧烈震荡，尽量减少酚/氯仿抽提，颠倒混匀动作要轻缓，离心在4℃进行，DNA溶液转移时动作也要轻缓等。
5.5
II型限制性内切酶可以识别和切割特定的核苷酸序列，-AAATTT-,-GATATC-,GGATCC-可能都是
5.6
是不是在考试，不知道有没有帮上忙啊，好运吧~