荧光定量pcr溶解曲线没有峰

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荧光定量pcr溶解曲线没有峰是因为:一般每加温一度,读一次信号,当温度到达PCR产物的Tm时,产物解离一下增多,曲线的横坐标是温度,纵坐标是荧光信号的变化,开始加热,信号变化不大,所以几乎是平的。

当加热接近于PCR产物Tm时,双链开始解离,荧光强度变小,机器会比较前后2个温度点的荧光强度,把2者的差值标在图上。Tm到达时,有一般双链解离,这时的荧光强度变化最大(峰值)。再加热,双链全部解离,所以荧光强度的变化又变小了。

技术原理

将标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后,完成高温变性,低温复性,适温延伸的热循环,并遵守聚合酶链反应规律,与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断,荧光素游离于反应体系中。

在特定光激发下发出荧光,随着循环次数的增加,被扩增的目的基因片段呈指数规律增长,通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度,求得Ct值,同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照,即可得出待测标本目的基因的拷贝数

以上内容参考:百度百科-实时荧光定量PCR

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